Diagnóstico de Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia em aves de postura comercial e matrizes comerciais pela técnica de hibridização fluorescente in situ (FISH)

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Gruchouskei, Leonardo
Data de Publicação: 2017
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/53993
Resumo: Orientadora : Profª. Drª. Aline de Marco Viott
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spelling Gruchouskei, LeonardoUniversidade Federal do Paraná. Setor Palotina. Programa de Pós-Graduação em Ciência AnimalViott, Aline de Marco, 1981-2022-08-12T20:25:56Z2022-08-12T20:25:56Z2017https://hdl.handle.net/1884/53993Orientadora : Profª. Drª. Aline de Marco ViottDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Palotina, Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. Defesa: Palotina, 18/12/2017Inclui referências : f. 22-25Resumo: Bactérias do gênero Brachyspira podem ocasionar enfermidades entéricas em aves e a correta identificação se faz necessário tendo em vista que algumas espécies não são patogênicas. Devido à característica fastidiosa de crescimento e a sua importância na agroindústria comercial, técnicas de identificação rápidas e eficazes se fazem necessárias. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia da técnica de hibridização fluorescente in situ (FISH) para o diagnóstico de Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia utilizando amostras de ceco de aves de postura comercial e matrizes comerciais fixadas em formol. Foram coletadas amostras de 112 aves com idade entre 35 e 82 semanas, sendo 42 oriundas de granjas de galinhas de postura comercial e 70 de granjas de matrizes de corte. Para avaliação primeiramente procedeu-se ao isolamento bacteriano a partir das fezes, técnica ouro para identificação do agente. As amostras positivas foram submetidas a qPCR para identificação de espécies patogênicas. Posteriormente, segmentos formolizados de ceco, dessas mesmas aves, foram processados pela técnica de FISH utilizando sondas marcadas de Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia. A comparação dos dados encontrados foi realizada através do teste não paramétrico de qui-quadrado. Das 112 amostras foram obtidos 40 isolamentos característicos de Brachyspira e destes, no qPCR, 14 identificadas como B. hyodysenteriae e 7 como Brachyspira intermedia, 2 foram positivas para ambas e 21 não foram caracterizadas. Na FISH 52 amostras foram positivas para Brachyspira sp, 22 para B. hyodysenteriae, 28 para B. intermedia, 7 para B. pilosicoli e 8 amostras foram positivas para duas espécies. A avaliação estatística revelou que a técnica de FISH foi capaz de indicar maior número de aves positivos quando comparada ao isolamento bacteriano e a qPCR, inclusive revelando aves positivos para B. pilosicoli que não tinham sido identificados anteriormente. Dessa forma conclui-se que a FISH apresentou-se eficaz na identificação das Brachyspiras avaliadas servindo assim como uma ferramenta rápida e eficiente para o diagnóstico. Palavras-chave: Espiroquetose intestinal aviária. Hibridização fluorescente in situ. Brachyspira.Abstract: Bacteria of the genus Brachyspira can cause enteric diseases in birds and its correct identification is necessary because some species are nonpathogenic. Due to the fastidious growth characteristic and importance of these bacteria in agroindustry, fast and effective identification techniques are required. The objective of this study was to evaluate the effectiveness of the Fluorescent in situ Hybridization technique (FISH) for diagnosis of the Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae, and Brachyspira intermedia, using formalin-fixed samples from the cecum of laying hens and commercial matrices. Samples were collected from 112 animals with age from 35 to 82 weeks, being 42 from commercial farm laying hens and 70 from broiler matrices farm. Firstly, the bacterial isolation was made from feces, which is a gold technique for microorganism identification. The samples were submitted to qPCR for identification of pathogenic species. Subsequently, the cecal fragments fixed with formalin, from the same birds, were processed through FISH technique, using marked probes of Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae, and Brachyspira intermedia. A comparison of the obtained data was performed through chi-square non-parametric test. From the 112 samples, it was obtained 40 bacterial isolates characteristic of Brachyspira. From that, qPCR identified 14 as B. hyodysenteriae and seven as Brachyspira intermedia, two samples were positive for both and 21 were no characterized. In FISH, 52 samples were positive for Brachyspira sp., 22 for B. hyodysenteriae, 28 for B. intermedia, 7 for B. pilosicoli and eight samples were positive for two bacterial species. The statistical evaluation showed that using the FISH technique it was possible to identify a greater number of positive animals in comparison with bacterial isolation and qPCR, inclusive identifying positive animals for B. pilosicoli, which were not identified before. Therefore, it is concluded that the FISH technique is efficient for identification of the Brachyspira species evaluated in this study as well as is a fast and efficient tool for the diagnosis. Key-words: Fluorescent in situ hybridization. Avian intestinal spirochaetosis. Brachyspira.32 f. : il., algumas color.application/pdfDisponível em formato digitalCiência AnimalDiagnóstico de Brachyspira pilosicoli, Brachyspira hyodysenteriae e Brachyspira intermedia em aves de postura comercial e matrizes comerciais pela técnica de hibridização fluorescente in situ (FISH)info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - LEONARDO GRUCHOUSKEI.pdfapplication/pdf1517830https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/53993/1/R%20-%20D%20-%20LEONARDO%20GRUCHOUSKEI.pdfcc709b72905f4ea588c45a4a5bc9775dMD51open access1884/539932022-08-12 17:25:56.12open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/53993Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082022-08-12T20:25:56Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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