Obtenção e caracterizaçãode bioferramentas direcionadas para o alvo b2a2 BCR-ABL1 com aplicação no estudo da LMC

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Yamanaka, Isabel Biasi, 1989-
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/70455
Resumo: Orientadora: Profª Drª Juliana Ferreira de Moura.
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spelling Yamanaka, Isabel Biasi, 1989-Moura, Juliana Ferreira de, 1975-Alvarenga, Larissa MagalhãesUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia2021-04-27T18:04:46Z2021-04-27T18:04:46Z2019https://hdl.handle.net/1884/70455Orientadora: Profª Drª Juliana Ferreira de Moura.Coorientadora: Profª Drª Larissa Magalhães Alvarenga.Tese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia. Defesa : Curitiba, 27/05/2019.Inclui referências: p. 104-112.Resumo: A Leucemia Mieloide Crônica (LMC) caracteriza-se pela presença do cromossomo Philadelphia (Ph). A patogênese da doença é atribuída à proteína quimérica BCR-ABL1 formada, que possui atividade tirosina cinase continuamente ativa. Atualmente, para o diagnóstico e monitoramento destes pacientes são empregadas técnicas de biologia molecular a nível genético. Na tentativa de obter resultados mais precisos, diferentes abordagens têm sido propostas empregando a detecção da proteína BCR-ABL1 como um alvo bastante promissor. Esta proteína apresenta uma estrutura complexa e neste trabalho nós propomos a síntese apenas do peptídeo correspondente às regiões da fusão. No presente estudo, ligantes peptídicos foram selecionados a partir da técnica de phage display direcionados para o peptídeo representativo da região de fusão- b2a2 (pepb2a2). Foram identificados dois clones (13S e 25S) que apresentaram afinidade frente ao pepb2a2 dose-dependente, sendo que na concentração de 1010 TU/mL tiveram reatividades comparáveis ao do anticorpo anti-b2a2. O clone 13S apresentou-se mais promissor e teve sua sequência aminoacídica sintetizada. Este ligante peptídico de 17 aminoácidos (NMY) foi conjugado a diferentes moléculas para caracterização. A capacidade de ligação frente ao pepb2a2 foi mantida após a síntese química. As interações do NMY com os peptídeos correspondentes às fusões mais comuns foram caracterizadas a partir do ensaio de spot synthesis. Ainda, o NMY-FITC foi testado em um modelo celular para o reconhecimento da proteína recombinante b2a2BCR-ABL1. Para tanto, foi necessária a construção de um vetor (Pb2a2) capaz de expressar b2a2BCR-ABL1 em células eucariontes. Em conclusão, este trabalho permitiu o desenvolvimento de dois insumos biotecnológicos para o avanço dos estudos da LMC- o ligante NMY e o vetor Pb2a2- que poderão ser utilizados como ferramentas em estudos futuros da LMC.Abstract: Chronic Myeloid Leukemia (CML) is characterized by the presence of the Philadelphia chromosome (Ph). Pathogenesis of the disease is attributed to the BCR-ABL1 protein with persistently active tyrosine kinase activity. Currently, techniques of molecular biology at the genetic level are used for diagnosis and monitoring of patients. In an attempt to obtain more accurate results, different types of performance indicators can be used to detect BCR-ABL1 protein as a very promising target. This protein presents a complex structure and in this study we propose the synthesis of the peptide corresponding only to the fusion regions. Peptide binders were selected from the phage display technique targeting the peptide representative of the fusion region-b2a2 (pepb2a2). Some clones (13S and 25S) had dose-dependent affinity with pepb2a2 and their reactivities were comparable to the anti-b2a2 antibody in the concentration of 1010 TU/ mL. 13S clone displayed best results and its amino acid sequence was synthesized. The 17 amino acids peptide (NMY) was conjugated to molecules for its characterization, without causing any losses to the binding capacity against pepb2a2. The interactions of NMY with peptides were characterized from the spot synthesis assay. In addition, NMY-FITC was tested in a cell system for recognition of the recombinant b2a2 BCR-ABL1 protein. A vector (Pb2a2) capable of expressing b2a2BCR-ABL1 in eukaryotic cells was synthetized for this assay. In conclusion, this work developed two biotechnological tools- NMY and vPb2a2 vector- for the advancement of CML studies.112 p. : il.application/pdfLeucemia Mielogênica Crônica BCR-ABL PositivaObtenção e caracterizaçãode bioferramentas direcionadas para o alvo b2a2 BCR-ABL1 com aplicação no estudo da LMCinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - T - ISABEL BIASI YAMANAKA.pdfapplication/pdf4384331https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/70455/1/R%20-%20T%20-%20ISABEL%20BIASI%20YAMANAKA.pdfc47a242c6b5a161c6e0e9abd272952c5MD51open access1884/704552021-04-27 15:04:47.069open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/70455Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082021-04-27T18:04:47Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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