Isolados de Candida provenientes de pacientes diabéticos e transplantados renais : análise filogenética, avaliação da resistência ao fluconazol e polimorfismo do gene ERG11

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Benedetti, Volmir Pitt
Data de Publicação: 2014
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1884/43551
Resumo: Orientadora : Drª Chirlei Glienke
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spelling Benedetti, Volmir PittUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia BásicaGlienke, Chirlei2016-09-21T12:43:55Z2016-09-21T12:43:55Z2014http://hdl.handle.net/1884/43551Orientadora : Drª Chirlei GlienkeTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 30/09/2014Inclui referências : f. 69-84Área de concentraçãoResumo: O considerável aumento das infecções fúngicas causadas por agentes oportunistas conferiu significativa importância a estas patologias nos últimos anos. Os principais fatores associados a esta patologia se relacionam a alterações na resposta imunológica do paciente. Entre os fungos oportunistas destacam-se as leveduras do gênero Candida, que possuem distintos mecanismos de virulência e expressiva variabilidade genética. O tratamento da candidíase tornou-se um grande desafio diante do aumento da resistência destas leveduras e o pequeno número de drogas disponíveis para terapêutica. Entre os distintos mecanismos de resistência das leveduras Candida spp, destacam-se as bombas de efluxo e as alterações mutacionais no gene ERG11. Neste contexto, foi realizada a investigação do polimorfismo no gene ERG11 de isolados de leveduras Candida spp e a correlação com o padrão de suscetibilidade ao antifúngico fluconazol. Para tanto, foram isolados 120 leveduras da saliva de pacientes diabéticos, transplantados renais e pessoas saudáveis, totalizando 190 idividuos. Foram realizados testes de suscetibilidade por meio do E-test®, segundo o documento M44-A2 (CLSI), para determinação da concentração inibitória mínima (CIM) ao Fluconazol. Para a identificação das espécies Candida spp amplificou-se por PCR, fragmentos do gene 28S do rDNA e da região ITS1-5.8S-ITS2 rDNA. Para a análise do polimorfismo do gene ERG11, amplificou-se fragmentos utilizando-se primers específicos para cada espécie de Candida spp. Os resultados encontrados demonstram que os pacientes diabéticos foram os mais colonizados por leveduras, com 68,75% de isolamento, seguidos dos transplantados com 51,35%. A espécie Candida albicans foi a espécie mais isolada, compondo 66,7% dos isolados, pertencentes a seis grupos populacionais. As mutações no gene ERG11 foram 82,8% (121) sinônimas e 17,1% (25) de sentido trocado, identificadas como F105L, D116E, K119N e S137L em C. albicans, e T224C e G263A em C. tropicalis. As mutações encontradas no gene ERG11 não influenciaram no padrão de suscetibilidade ao fluconazol. Desta forma, os pacientes diabéticos foram os mais colonizados por leveduras, sendo C. albicans a espécie mais frequente e a que apresentou maior diversidade genética. O polimorfismo encontrado nos fragmentos do gene ERG11 não provocou diminuição no padrão de suscetibilidade dos isolados frente ao antifúngo fluconazol. PALAVRAS-CHAVE: Transplantados; C. albicans; Fluconazol; ERG11.Abstract: ISOLATED OF Candida FROM DIABETIC AND RENAL TRANSPLANTED PATIENTS: ANALYSIS PHYLOGENETIC, FLUCONAZOL RESISTANCE, AND GENE ERG11 POLYMORPHISM The considerable increase in fungal infections caused by opportunistic agents attributed significant importance to these infections in recent years. The main factors associated with this disease are related to changes in the patient's immune response. Among the opportunistic fungi are the yeasts of the genus Candida, which have different mechanisms of virulence and a high genetic variability. The treatment of candidiasis has become a major challenge before the increased resistance these yeasts and the small number of drugs available for treatment. Among the various resistance mechanisms of yeast Candida spp, we highlight the efflux pumps and mutational changes in the ERG11 gene. In this context, the research was conducted the polymorphisms in ERG11 gene isolated from yeast Candida spp and correlates with the susceptibility to Fluconazole. For this, 120 yeasts saliva of diabetic patients, kidney transplant recipients and healthy individuals were isolated. Susceptibility testing by the E-Test® were performed, according to the document M44-A2 (CLSI) for determination of MIC to Fluconazole. For the identification of the species Candida spp, fragments of 28S rDNA gene and regions ITS1-5.8S-ITS2 of the rDNA gene were amplified by PCR. For the analysis of polymorphism of ERG11 gene, fragments using specific primers for each species of Candida spp were amplified. The results demonstrate that diabetic patients were the most colonized by yeast, with 68.75% of isolation, followed by transplanted with 51.35%. The species Candida albicans was the most frequent species, making up 66.7% of the isolated belonging to six population groups. Mutations in ERG11 gene were 82.8% (121) silent and 17.1% (25) changed direction, identified as F105L, D116E, K119N and S137L in C. Albicans, and T224C and G263A in C. tropicalis. The mutations found in the ERG11 gene did not influence the pattern of susceptibility to Fluconazole. It was demonstrated that diabetic patients were the most colonized by yeasts, being C. albicans the most frequent kind and the one which had the greatest phylogenetic variation. The polymorphisms found in the gene fragments ERG11 did not caused decrease in the isolated front susceptibility to antifungal fluconazole standard. KEYWORDS: Transplanted; C. albicans; Fluconazol; ERG11.97f.application/pdfDisponível também em formato digitalCandida albicansFluconazolPolimorfismo (Genetica)Farmacorresistência FúngicaIsolados de Candida provenientes de pacientes diabéticos e transplantados renais : análise filogenética, avaliação da resistência ao fluconazol e polimorfismo do gene ERG11info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessTHUMBNAILR - T - VOLMIR PITT BENEDETTI.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1308https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43551/1/R%20-%20T%20-%20VOLMIR%20PITT%20BENEDETTI.pdf.jpg06ebbb1f6b4f3b639085fab6c30b4928MD51open accessTEXTR - T - VOLMIR PITT BENEDETTI.pdf.txtExtracted Texttext/plain207731https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43551/2/R%20-%20T%20-%20VOLMIR%20PITT%20BENEDETTI.pdf.txtcfa17687ce1ce44bead41ceb7a95be8fMD52open accessORIGINALR - T - VOLMIR PITT BENEDETTI.pdfapplication/pdf1420851https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/43551/3/R%20-%20T%20-%20VOLMIR%20PITT%20BENEDETTI.pdfea4f1e3ba3d0d1470343f72cdfc131f4MD53open access1884/435512016-09-21 09:43:56.057open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/43551Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082016-09-21T12:43:56Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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