Diferenciação da expressão gênica de Fonsecaea monophora em modelo parasitário utilizando a técnica de qPCR

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Flôr, Izadora Cervelin
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/81528
Resumo: Orientadora: Profa. Dra. Vânia Aparecida Vicente
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spelling Belmonte-Lopes, RicardoUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e PatologiaVicente, Vânia AparecidaFlôr, Izadora Cervelin2023-03-16T15:30:06Z2023-03-16T15:30:06Z2022https://hdl.handle.net/1884/81528Orientadora: Profa. Dra. Vânia Aparecida VicenteCoorientadores: Profa. Dra. Renata Rodrigues Gomes e Dr. Ricardo Belmonte-LopesDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia. Defesa : Curitiba, 30/06/2022Inclui referências: p. 51-59Resumo: Entre as espécies de leveduras negras reunidas no gênero Fonsecaea estão os agentes causais da cromoblastomicose, uma infecção cutânea-subcutânea, reconhecida como uma micose de implantação associada a lesões traumáticas causadas por fontes ambientais. A doença é caracterizada por aspectos crônicos de evolução progressiva e de difícil tratamento, acometendo principalmente trabalhadores rurais imunocompetentes, sendo reconhecida pela OMS como uma doença negligenciada. Neste contexto, o estudo de expressão gênica pode fornecer dados que permitam compreender melhor os genes envolvidos nos mecanismos de patogenicidade destes agentes. Tendo em vista que ainda há muitos aspectos da infecção por este gênero que não estão completamente elucidados, este trabalho visou avaliar, através da metodologia de transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR), a diferenciação da expressão gênica em Fonsecaea monophora CBS 269.37, um dos principais agentes etiológicos da cromoblastomicose, sob diferentes condições de crescimento in vitro e por meio do modelo parasitário utilizando a larva Tenebrio molitor. Com base em dados não publicados do transcriptoma da espécie, foram selecionados para avaliação da expressão sete genes envolvidos em diferentes processos biológicos ou funções moleculares: AYO21_09850 (NADPH-citocromo P450 redutase), AYO21_11301 (Peroxidase), AYO21_02611 (Formato desidrogenase), duas diferentes lacases/multicobre oxidases (AYO21_05450 e AYO21_07092), AYO21_01584 (álcool desidrogenase) e AYO21_01590 (homocisteína Smetiltransferase). Com base na bibliografia, outros genes foram selecionados como candidatos a genes endógenos:ß-tubulina, RPL27a, Rpb2, Rps9 e AYO21_07350 (gama actina). De acordo com os resultados, verificou-se que os genes ß-tubulina, AYO21_07350 (gama actina), AYO21_05450 (Lacase), AYO21_01590 (homocisteína S-metiltransferase), AYO21_1584 (álcool desidrogenase) e AYO21_02611 (Formato desidrogenase) apresentaram níveis de expressão gênica diminuídos nas larvas inoculadas em relação ao desenvolvimento in vitro da linhagem em estudo. Em contrapartida, os genes AYO21_09850 (NADPH-citocromo P450 redutase), AYO21_07092 (Lacase) e AYO21_11301 (Peroxidase) apresentaram expressão aumentada em larvas infectadas, o que sugere que esses genes podem estar relacionados aos fatores de virulência do fungo. Os genes RPL27a, Rpb2 e Rps9 que inicialmente eram candidatos a normalizadores da reação também apresentaram expressão diferencial elevada em larvas inoculadas e isso pode ser explicado pelo fato de que alguns genes que codificam proteínas ribossomais podem estar associados à expressão de virulência do patógeno.Abstract: Among the black yeast species gathered in the Fonsecaea genus are the causal agents of chromoblastomycosis, a cutaneous-subcutaneous infection recognized as an implantation mycosis associated with traumatic injuries caused by environmental sources. The disease is characterized by chronic aspects of progressive evolution and difficult to treat, affecting mainly immunocompetent rural workers, being recognized by the OMS as a neglected disease. In this context, the study of gene expression can provide data that allow a better understanding of the genes involved in the pathogenic mechanisms of these agents. Considering that there are still many aspects of infection by this genus that are not completely elucidated, this work aimed to evaluate, through the methodology real-time reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-qPCR), the differentiation of gene expression in Fonsecaea monophora CBS 269.37, one of the main etiological agents of chromoblastomycosis, under different in vitro growth conditions and through a parasitic model using the larvae Tenebrio molitor. Based on unpublished data from the transcriptome of the species, seven genes involved in different biological processes or molecular functions were selected for expression evaluation: AYO21_09850 (NADPHcytochrome P450 reductase), AYO21_11301 (Peroxidase), AYO21_02611 (Formate dehydrogenase), two different laccases/multicopper oxidases (AYO21_05450 and AYO21_07092), AYO21_01584 (alcohol dehydrogenase) and AYO21_01590 (homocysteine S-methyltransferase). Based on the bibliography, other genes were selected as candidates for endogenous genes: ß-tubulin, RPL27a, Rpb2, Rps9 and AYO21_07350 (gamma actin). According to the results, it was verified that the genes ß-tubulin, AYO21_07350 (gamma actin), AYO21_05450 (Laccase), AYO21_01590 (homocysteine S-methyltransferase), AYO21_1584 (alcohol dehydrogenase) and AYO21_02611 (Formate dehydrogenase) showed decreased levels of gene expression in the inoculated larvae in relation to the in vitro development of the strain under study. In contrast, the genes AYO21_09850 (NADPH-cytochrome P450 reductase), AYO21_07092 (Laccase) and AYO21_11301 (Peroxidase) showed increased expression in infected larvae, suggesting that these genes may be related to fungal virulence factors. The genes RPL27a, Rpb2 and Rps9 which were initially candidates for normalizing the reaction, also showed high differential expression in inoculated larvae and this can be explained by the fact that some genes that encode ribosomal proteins may be associated with the expression of the pathogen's virulence.1 recurso online : PDF.application/pdfLevedurasCromoblastomicoseExpressão gênicaMicrobiologiaDiferenciação da expressão gênica de Fonsecaea monophora em modelo parasitário utilizando a técnica de qPCRinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - IZADORA CERVELIN FLOR.pdfapplication/pdf4176114https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/81528/1/R%20-%20D%20-%20IZADORA%20CERVELIN%20FLOR.pdfa1c700b95f4ac33904e55dec4cdb195bMD51open access1884/815282023-03-16 12:30:07.017open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/81528Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082023-03-16T15:30:07Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
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