Adequação de técnicas moleculares para a detecção de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 em triatomíneos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Haidamak, Juciliane
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1884/40946
Resumo: Orientadora : Dra. Larissa Reifur
id UFPR_9eb9cc863b92daf381e295885af8cccb
oai_identifier_str oai:acervodigital.ufpr.br:1884/40946
network_acronym_str UFPR
network_name_str Repositório Institucional da UFPR
repository_id_str 308
spelling Haidamak, JucilianeKlisiowicz, Débora do RocioUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia BásicaReifur, Larissa2016-05-17T19:03:32Z2016-05-17T19:03:32Z2013http://hdl.handle.net/1884/40946Orientadora : Dra. Larissa ReifurCo-orientadora : Dra. Débora do Rocio KlisiowiczDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Ciencias Biológicas (Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica). Defesa: Curitiba, 11/03/2013Inclui referências : f. 48-55Área de concentração : ParasitologiaResumo: Em 2006, o Brasil recebeu a certificação internacional de eliminação da transmissão da doença de Chagas pelo Triatoma infestans, fornecida pela Organização Pan- Americana da Saúde, tendo o estado da Bahia como o último a receber a certificação. Apesar de o principal vetor ter sido eliminado, outras espécies assumiram o seu lugar e algumas delas apareceram infectadas com Trypanosoma cruzi. Atualmente, a Secretaria de Estado da Saúde da Bahia (SESAB) utiliza apenas o método direto a fresco para o diagnóstico de T. cruzi em conteúdo intestinal de triatomíneos. O método baseia-se na visualização de movimentação sugestiva do protozoário em fezes frescas, portanto, é um teste de baixa sensibilidade. A eficiência da detecção do parasito pode ser melhorada por técnicas moleculares. Neste trabalho foi realizada a adequação de duas técnicas, a amplificação em cadeia da polimerase (PCR) e a amplificação isotérmica mediada por alça (LAMP) para otimizar a detecção de T. cruzi em fezes e urina de triatomíneos do centro norte do estado da Bahia. As otimizações das técnicas de PCR e LAMP possibilitou detectar uma célula de T. cruzi (0,5 fg de DNA) e 1 ng de DNA da amostra controle, respectivamente. Para as amostras teste, 51 triatomíneos da espécie Triatoma brasiliensis e Triatoma pseudomaculata, foram utilizadas para a detecção do DNA de T. cruzi. A técnica de PCR foi capaz de detectar 31,36 % (16/51) de positividade em insetos, sendo mais sensível que o método direto a fresco, onde o mesmo detectou apenas uma amostra, correspondendo a 1,96 % (1/51). O uso de técnicas de detecção mais sensíveis e específicas é importante para apresentar a real situação de triatomíneos infectados por T. cruzi e a partir dos resultados, obter dados epidemiológicos mais acurados sobre a doença de Chagas. A presença de T. cruzi em triatomíneos com potencial transmissão vetorial é um indicativo que o parasito pode estar presente em uma carga parasitária suficiente para manter seu ciclo biológico na região. Palavras-chave: Trypanosoma cruzi, método direto a fresco, PCR, LAMP, triatomíneo.Abstract: In 2006, Brazil received the international certification of elimination of transmission of Chagas disease by Triatoma infestans, provided by the Pan American Health Organization. Bahia was the last Brazilian state to receive this certification. Although the Triatoma infestans has been eliminated from Brazil, other species proliferated and some of them have been found infected with Trypanosoma cruzi. Currently, the Secretaries of State for Health (SSH) adopt the direct fresh method for the diagnosis of T. cruzi in triatomine gut contents. This method is of low sensitivity and specificity as it is based on the visualization of movements suggestive of a tripanosomatid. Considering that parasite detection can be improved by molecular techniques, in this work, the polymerase chain reaction (PCR) and the loop-mediated isothermal amplification (LAMP) were used to optimize the detection of T. cruzi in feces and urine of triatomines. Using control DNA from an in vitro culture, it was possible to detect 0.5 fg of T. cruzi DNA, by PCR and 1 ng by LAMP. These reaction conditions were then used with DNA samples extracted from triatomines collected in the central north part of Bahia state. Out of the 51 triatomines collected, Triatoma pseudomaculata and Triatoma brasiliensis prevailed. Through PCR, 31,36 % (16/51) of the triatomines were positive for T. cruzi DNA, whereas the direct fresh method detected only one sample possibly positive, corresponding to 1,96 % (1/51). The LAMP technique probably needs more starting DNA in the sample to be able to amplify, thus it will be further optimized. In conclusion, the use of more sensitive and specific techniques is important to show the real situation of T. cruzi infected triatomines in Brazil. The presence of T. cruzi in triatomine species like T. brasiliensis and T. pseudomaculada, which are potential vectors for T. cruzi transmission, is an indication that the parasite may be present in sufficient amounts to maintain their life cycle in Bahia. Keywords: Trypanosoma cruzi, direct fresh method, PCR, LAMP, triatomine.57 f. : il. algumas color., tabs.application/pdfDisponível também em formato digitalMicrobiologiaParasitologiaTrypanosoma cruziReaçao em cadeia de polimeraseChagas, Doença deAdequação de técnicas moleculares para a detecção de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 em triatomíneosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - JUCILIANE HAIDAMAK.pdfapplication/pdf1041171https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/40946/1/R%20-%20D%20-%20JUCILIANE%20HAIDAMAK.pdf9bd348fa230cfa0ecb107f717c4ec899MD51open accessTEXTR - D - JUCILIANE HAIDAMAK.pdf.txtExtracted Texttext/plain103230https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/40946/2/R%20-%20D%20-%20JUCILIANE%20HAIDAMAK.pdf.txt786843e48ad35082c6270ef704733094MD52open accessTHUMBNAILR - D - JUCILIANE HAIDAMAK.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1118https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/40946/3/R%20-%20D%20-%20JUCILIANE%20HAIDAMAK.pdf.jpg0ad14f280b2e019683343d5d89e8d896MD53open access1884/409462016-05-17 16:03:32.256open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/40946Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082016-05-17T19:03:32Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
dc.title.none.fl_str_mv Adequação de técnicas moleculares para a detecção de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 em triatomíneos
title Adequação de técnicas moleculares para a detecção de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 em triatomíneos
spellingShingle Adequação de técnicas moleculares para a detecção de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 em triatomíneos
Haidamak, Juciliane
Microbiologia
Parasitologia
Trypanosoma cruzi
Reaçao em cadeia de polimerase
Chagas, Doença de
title_short Adequação de técnicas moleculares para a detecção de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 em triatomíneos
title_full Adequação de técnicas moleculares para a detecção de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 em triatomíneos
title_fullStr Adequação de técnicas moleculares para a detecção de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 em triatomíneos
title_full_unstemmed Adequação de técnicas moleculares para a detecção de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 em triatomíneos
title_sort Adequação de técnicas moleculares para a detecção de Trypanosoma cruzi Chagas, 1909 em triatomíneos
author Haidamak, Juciliane
author_facet Haidamak, Juciliane
author_role author
dc.contributor.other.none.fl_str_mv Klisiowicz, Débora do Rocio
Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia Básica
dc.contributor.author.fl_str_mv Haidamak, Juciliane
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Reifur, Larissa
contributor_str_mv Reifur, Larissa
dc.subject.por.fl_str_mv Microbiologia
Parasitologia
Trypanosoma cruzi
Reaçao em cadeia de polimerase
Chagas, Doença de
topic Microbiologia
Parasitologia
Trypanosoma cruzi
Reaçao em cadeia de polimerase
Chagas, Doença de
description Orientadora : Dra. Larissa Reifur
publishDate 2013
dc.date.issued.fl_str_mv 2013
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2016-05-17T19:03:32Z
dc.date.available.fl_str_mv 2016-05-17T19:03:32Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/1884/40946
url http://hdl.handle.net/1884/40946
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.none.fl_str_mv Disponível também em formato digital
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 57 f. : il. algumas color., tabs.
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPR
instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron:UFPR
instname_str Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron_str UFPR
institution UFPR
reponame_str Repositório Institucional da UFPR
collection Repositório Institucional da UFPR
bitstream.url.fl_str_mv https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/40946/1/R%20-%20D%20-%20JUCILIANE%20HAIDAMAK.pdf
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/40946/2/R%20-%20D%20-%20JUCILIANE%20HAIDAMAK.pdf.txt
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/40946/3/R%20-%20D%20-%20JUCILIANE%20HAIDAMAK.pdf.jpg
bitstream.checksum.fl_str_mv 9bd348fa230cfa0ecb107f717c4ec899
786843e48ad35082c6270ef704733094
0ad14f280b2e019683343d5d89e8d896
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1813898779448836096

Registros relacionados