Análise epigenética de células-tronco mesenquimais na indução adipogênica

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Zych, Jaiesa
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1884/30388
Resumo: Orientador : Prof. Dr. Alejandro Correa
id UFPR_b2a2f7bdfeb5de5fe06338258c7486d6
oai_identifier_str oai:acervodigital.ufpr.br:1884/30388
network_acronym_str UFPR
network_name_str Repositório Institucional da UFPR
repository_id_str 308
spelling Zych, JaiesaUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e MolecularDominguez, Alejandro Correa2018-04-20T18:26:55Z2018-04-20T18:26:55Z2013http://hdl.handle.net/1884/30388Orientador : Prof. Dr. Alejandro CorreaTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa: Curitiba, 25/03/2013Bibliografia : fls. 109-117-142-148Resumo: A diferenciação celular é acompanhada por mudanças no perfil da expressão gênica. Mecanismos epigenéticos envolvendo estrutura da cromatina e arquitetura nuclear regulam estas alterações. A diferenciação adipogênica de células-tronco mesenquimais isoladas da medula óssea (CTMs-MO) ou de tecido adiposo (CTMs-TA) foi utilizada como modelo para investigar estes mecanismos. A análise da lâmina nuclear, dos nucléolos e das histonas modificadas me/2me/3meH3K4, 3meH3K9, 3meH3K27, H2AZ e acH3 permitiu estabelecer um modelo inicial das alterações ocorridas. Os efeitos dos mecanismos epigenéticos na diferenciação adipogênica foram investigados utilizando-se os agentes modificadores de cromatina tricostatina A (TSA), um inibidor de histona desacetilases, e 5-aza-2'-deoxicitidina (5azadC), um agente desmetilante. Culturas subconfluentes de CTMs foram tratadas com 5, 50 ou 500 nM de TSA ou com 1, 10 ou 100 nM de 5azadC durante dois dias antes de se iniciar a indução da adipogênese. Após 14 dias, a diferenciação foi quantificada pela absorbância do corante Oil Red O e a expressão dos genes adipogênicos PPARG e FABP4, e do gene anti-adipogênico GATA2 foi avaliada por qPCR. O tratamento com 500 nM de TSA significativamente aumentou a expressão de acH3, embora a proliferação celular tenha diminuído nesta concentração. A TSA significativamente reduziu a adipogênese, exceto o tratamento com 5 nM em CTMs-MO. No entanto, houve associação parcial entre diferenciação e expressão gênica. O tratamento com 5azadC significativamente diminuiu a diferenciação adipogênica em todas as condições avaliadas e isto resultou na regulação negativa de PPARG e FABP4, e positiva de GATA2. Embora o conteúdo de DNA não tenha mudado nos tratamentos com 5azadC, a proliferação celular foi reduzida 24 horas após o término dos tratamentos. A resposta aos tratamentos foi mais acentuada em CTMs-TA do que em CTMs-MO, sugerindo a existência de distintas memórias epigenéticas conforme a origem celular. Como a assinatura epigenética afeta a diferenciação, ao se conhecer qual a linhagem-alvo preferencial daquela fonte de CTM, é possível direcionar seu uso nas terapias celulares. Assim, cada tipo celular teria uma aplicação específica visando melhorar a eficiência do processo de diferenciação.Abstract: Cellular differentiation is followed by alterations in the pattern of gene expression. Epigenetic mechanisms involving chromatin structure and nuclear architecture regulate these changes. Adipocyte differentiation of mesenchymal stem cells isolated from bone marrow (BM-MSCs) or adipose tissue (ADSCs) were used to investigate these changes. Analysis of nuclear lamin, nucleoli, histone modifications me/2me/3meH3K4, 3meH3K9, 3meH3K27, H2AZ and acH3 resulted in an initial model of the changes found. The effects of these epigenetic mechanisms in adipocyte differentiation were investigated using the chromatin-modifying agents, trichostatin A (TSA), a histone deacetylases inhibitor, and 5-aza-2'-deoxycytidine (5azadC), a demethylating agent. Subconfluent MSCs cultures were treated with 5, 50 or 500 nM of TSA or with 1, 10 or 100 ?M of 5azadC for two days before starting adipogenesis induction. After 14 days, differentiation was quantified by absorbance of Oil Red O stain, and the expression of the adipocyte genes, PPARG and FABP4, and of the anti-adipocyte gene, GATA2, was evaluated by qPCR. Treatment with 500 nM of TSA significantly increased acH3 expression, although cell proliferation had been decreased in this concentration. TSA significantly reduced adipogenesis, except treatment with 5 nM in BM-MSCs. However, there was a partial association between differentiation and gene expression. 5azadC treatment significantly decreased adipocyte differentiation in all conditions evaluated, and this resulted in downregulation of PPARG and FABP4, and upregulation of GATA2. Although, DNA content did not change with 5azadC treatment, cell proliferation was reduced 24 h after completion of treatments. Treatment response was stronger in ADSCs than in BM-MSCs, suggesting the existence of distinct epigenetic memories according to cell origin. As epigenetic signatures affect differentiation, to know the preferential lineage target of the MSC source could direct the use of MSCs in cell therapies. Thereby, each cell source would have a specific application aiming to improve the differentiation process efficiency.154f. : il., [algumas color]., tabs., grafs.application/pdfDisponível em formato digitalTesesCélulas-troncoCelulas - DiferenciaçãoAdipogeniaBiologia molecularAnálise epigenética de células-tronco mesenquimais na indução adipogênicainfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - T - JAIESA ZYCH.pdfR - T - JAIESA ZYCH.pdfapplication/pdf5875690https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30388/1/R%20-%20T%20-%20JAIESA%20ZYCH.pdf82f20289ec78df7a85102d964b4ab26cMD51open access1884/303882018-04-20 15:26:55.988open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/30388Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082018-04-20T18:26:55Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Análise epigenética de células-tronco mesenquimais na indução adipogênica
title Análise epigenética de células-tronco mesenquimais na indução adipogênica
spellingShingle Análise epigenética de células-tronco mesenquimais na indução adipogênica
Zych, Jaiesa
Teses
Células-tronco
Celulas - Diferenciação
Adipogenia
Biologia molecular
title_short Análise epigenética de células-tronco mesenquimais na indução adipogênica
title_full Análise epigenética de células-tronco mesenquimais na indução adipogênica
title_fullStr Análise epigenética de células-tronco mesenquimais na indução adipogênica
title_full_unstemmed Análise epigenética de células-tronco mesenquimais na indução adipogênica
title_sort Análise epigenética de células-tronco mesenquimais na indução adipogênica
author Zych, Jaiesa
author_facet Zych, Jaiesa
author_role author
dc.contributor.other.pt_BR.fl_str_mv Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
dc.contributor.author.fl_str_mv Zych, Jaiesa
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Dominguez, Alejandro Correa
contributor_str_mv Dominguez, Alejandro Correa
dc.subject.por.fl_str_mv Teses
Células-tronco
Celulas - Diferenciação
Adipogenia
Biologia molecular
topic Teses
Células-tronco
Celulas - Diferenciação
Adipogenia
Biologia molecular
description Orientador : Prof. Dr. Alejandro Correa
publishDate 2013
dc.date.issued.fl_str_mv 2013
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2018-04-20T18:26:55Z
dc.date.available.fl_str_mv 2018-04-20T18:26:55Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/1884/30388
url http://hdl.handle.net/1884/30388
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.relation.pt_BR.fl_str_mv Disponível em formato digital
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 154f. : il., [algumas color]., tabs., grafs.
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPR
instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron:UFPR
instname_str Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron_str UFPR
institution UFPR
reponame_str Repositório Institucional da UFPR
collection Repositório Institucional da UFPR
bitstream.url.fl_str_mv https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30388/1/R%20-%20T%20-%20JAIESA%20ZYCH.pdf
bitstream.checksum.fl_str_mv 82f20289ec78df7a85102d964b4ab26c
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1813898681369231360

Registros relacionados