Construção e caracterização de estirpes mutantes de Herbaspirillum seropedicae nos genes fnr1, fnr2 e fnr3
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2011 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPR |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/1884/25504 |
Resumo: | Resumo: Herbaspirillum seropedicae e uma bacteria fixadora de nitrogenio da classe ƒÀ das Proteobacteria, encontrada em associacao com diferentes Poaceae, como trigo, arroz, sorgo e cana-de-acucar. O genoma de H. seropedicae (GENOPAR) possui tres genes homologos a fnr. As proteinas FNR sao reguladores transcricionais que agem como sensores do estado redox intracelular, regulando um grande numero de genes em resposta a mudancas nos niveis de O2. Neste trabalho, foram construidos sete mutantes por delecao, fnr1, fnr2, fnr3, fnr1fnr2, fnr1fnr3, fnr2fnr3 e fnr1fnr2fnr3. Estes mutantes foram deficientes no crescimento sob condicoes limitantes de oxigenio e o triplo mutante foi menos resistente a NO2 -. Nenhuma evidencia foi encontrada a respeito do envolvimento de FNR na utilizacao de ions amonio ou nitrato como fonte de nitrogenio. Resultados obtidos anteriormente mostraram que a proteina NifA de H. seropedicae, responsavel pela ativacao da expressao dos genes nif, e inativada em uma estirpe mutante de scherichia coli no gene fnr. Devido a esse resultado o possivel envolvimento de FNR na fixacao biologica de nitrogenio de H. seropedicae foi investigado. Os resultados obtidos mostraram que as proteinas FNR nao sao necessarias para a atividade da nitrogenase. Experimentos de determinacao da expressao genica mostraram que FNR reprime a expressao dos genes nifA e nifB de H. seropedicae, e tambem do operon fixNOQP. Experimentos realizados com fusoes entre os genes fnr1, fnr2 e fnr3 com o gene reporter lacZ mostraram que a expressao do gene fnr2 e dependente das proteinas FNR e que a expressao de fnr3 e reprimida pelas outras proteinas FNR. Por fim, os resultados obtidos mostram q e as proteinas FNR de H. seropedicae nao sao essenciais a fixacao biologica de nitrogenio, mas podem estar envolvidas em um fino mecanismo de regulacao da expressao de genes requeridos para fixacao de nitrogenio, permitindo que estes genes sejam expressos quando as concentracoes de oxigenio sao otimas para a fixacao biologica de nitrogenio. |
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Batista, Marcelo BuenoUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduaçao em BioquímicaPetkowicz, Carmen Lucia de Oliveira2011-04-14T13:51:26Z2011-04-14T13:51:26Z2011-04-14http://hdl.handle.net/1884/25504Resumo: Herbaspirillum seropedicae e uma bacteria fixadora de nitrogenio da classe ƒÀ das Proteobacteria, encontrada em associacao com diferentes Poaceae, como trigo, arroz, sorgo e cana-de-acucar. O genoma de H. seropedicae (GENOPAR) possui tres genes homologos a fnr. As proteinas FNR sao reguladores transcricionais que agem como sensores do estado redox intracelular, regulando um grande numero de genes em resposta a mudancas nos niveis de O2. Neste trabalho, foram construidos sete mutantes por delecao, fnr1, fnr2, fnr3, fnr1fnr2, fnr1fnr3, fnr2fnr3 e fnr1fnr2fnr3. Estes mutantes foram deficientes no crescimento sob condicoes limitantes de oxigenio e o triplo mutante foi menos resistente a NO2 -. Nenhuma evidencia foi encontrada a respeito do envolvimento de FNR na utilizacao de ions amonio ou nitrato como fonte de nitrogenio. Resultados obtidos anteriormente mostraram que a proteina NifA de H. seropedicae, responsavel pela ativacao da expressao dos genes nif, e inativada em uma estirpe mutante de scherichia coli no gene fnr. Devido a esse resultado o possivel envolvimento de FNR na fixacao biologica de nitrogenio de H. seropedicae foi investigado. Os resultados obtidos mostraram que as proteinas FNR nao sao necessarias para a atividade da nitrogenase. Experimentos de determinacao da expressao genica mostraram que FNR reprime a expressao dos genes nifA e nifB de H. seropedicae, e tambem do operon fixNOQP. Experimentos realizados com fusoes entre os genes fnr1, fnr2 e fnr3 com o gene reporter lacZ mostraram que a expressao do gene fnr2 e dependente das proteinas FNR e que a expressao de fnr3 e reprimida pelas outras proteinas FNR. Por fim, os resultados obtidos mostram q e as proteinas FNR de H. seropedicae nao sao essenciais a fixacao biologica de nitrogenio, mas podem estar envolvidas em um fino mecanismo de regulacao da expressao de genes requeridos para fixacao de nitrogenio, permitindo que estes genes sejam expressos quando as concentracoes de oxigenio sao otimas para a fixacao biologica de nitrogenio.application/pdfTesesBacterias nitrificantesNitrogenio - FixaçãoConstrução e caracterização de estirpes mutantes de Herbaspirillum seropedicae nos genes fnr1, fnr2 e fnr3info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALDISSERTACAO MBB 4 VERSAO POS BANCA.pdfapplication/pdf3921416https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/25504/1/DISSERTACAO%20MBB%204%20VERSAO%20POS%20BANCA.pdf89d3d0eadaabce47258a9240600c255eMD51open accessTEXTDISSERTACAO MBB 4 VERSAO POS BANCA.pdf.txtDISSERTACAO MBB 4 VERSAO POS BANCA.pdf.txtExtracted Texttext/plain200030https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/25504/2/DISSERTACAO%20MBB%204%20VERSAO%20POS%20BANCA.pdf.txtea77ae5c88698221e870a3dbb756784dMD52open accessTHUMBNAILDISSERTACAO MBB 4 VERSAO POS BANCA.pdf.jpgDISSERTACAO MBB 4 VERSAO POS BANCA.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1224https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/25504/3/DISSERTACAO%20MBB%204%20VERSAO%20POS%20BANCA.pdf.jpg87c9a36d3315e0a38a69cbc9eb5ab65fMD53open access1884/255042016-04-07 03:25:41.413open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/25504Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082016-04-07T06:25:41Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false |
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