Análise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativos
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2013 |
Tipo de documento: | Dissertação |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UFPR |
Texto Completo: | http://hdl.handle.net/1884/30062 |
Resumo: | Resumo: Durante a prospecção por lipases em uma biblioteca metagenômica foram obtidos clones sem atividade lipolítica mas com fenótipo diferenciado visivelmente detectável. O clone M01, produtor de um composto marrom com alto rendimento mesmo em condições laboratoriais, foi investigado. O inserto foi quase totalmente sequenciado e, através de mutação, foi possível identificar que uma única ORF, homóloga a 4-hidroxifenilpiruvato dioxigenase (4-HPPD), conferia ao clone a capacidade de sintetizar o composto marrom. Nenhum outro gene relacionado foi encontrado, mas três ORFs encontradas codificando para proteases podem representar alvos de estudo com potencial biotecnológico. 4-HPPD é a segunda enzima da via catabólica da tirosina, convertendo hidroxifenilpiruvato (HPP) a homogentisato (HGA). Quando a produção é alta, HGA é excretado da célula, sofrendo auto-oxidação e auto-polimerização, gerando piomelanina, composto de coloração marrom. Em paralelo à produção de piomelanina e na presença de indol, através de um mecanismo ainda não desvendado, o organismo hospedeiro pode gerar duas moléculas coloridas com atividade antibiótica e citotóxica, turbomicina A e turbomicina B. Essas moléculas foram obtidas através de abordagem metagenômica apenas recentemente e são muito pouco estudadas, representando possíveis novos compostos com atividade biológica. A quantidade de composto marrom sintetizada pelo clone é uma função da composição do meio de cultivo e dos pHs inicias testados, o que sinaliza a possibilidade de otimização da produção. A solubilidade do composto marrom e das turbomicinas é diferencial em função da polaridade e do pH dos solventes testados, sugerindo margem para otimização da extração e purificação. O composto marrom produzido pelo clone M01 foi extraído e fracionado até a obtenção de formas purificadas das turbomicinas. A pureza relativa e identidade das moléculas foram confirmadas por TLC, MALDI-TOF e Q-TOF. A turbomicina A teve seu potencial antibacteriano avaliado, apresentando resultado positivo contra as estirpes Gram-positivas testadas. |
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Seccon, Denny MarcelUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciencias - BioquímicaFaoro, HelissonWassem, RoseliPedrosa, Fábio Oliveira, 1947-2013-08-06T15:03:15Z2013-08-06T15:03:15Z2013-08-06http://hdl.handle.net/1884/30062Resumo: Durante a prospecção por lipases em uma biblioteca metagenômica foram obtidos clones sem atividade lipolítica mas com fenótipo diferenciado visivelmente detectável. O clone M01, produtor de um composto marrom com alto rendimento mesmo em condições laboratoriais, foi investigado. O inserto foi quase totalmente sequenciado e, através de mutação, foi possível identificar que uma única ORF, homóloga a 4-hidroxifenilpiruvato dioxigenase (4-HPPD), conferia ao clone a capacidade de sintetizar o composto marrom. Nenhum outro gene relacionado foi encontrado, mas três ORFs encontradas codificando para proteases podem representar alvos de estudo com potencial biotecnológico. 4-HPPD é a segunda enzima da via catabólica da tirosina, convertendo hidroxifenilpiruvato (HPP) a homogentisato (HGA). Quando a produção é alta, HGA é excretado da célula, sofrendo auto-oxidação e auto-polimerização, gerando piomelanina, composto de coloração marrom. Em paralelo à produção de piomelanina e na presença de indol, através de um mecanismo ainda não desvendado, o organismo hospedeiro pode gerar duas moléculas coloridas com atividade antibiótica e citotóxica, turbomicina A e turbomicina B. Essas moléculas foram obtidas através de abordagem metagenômica apenas recentemente e são muito pouco estudadas, representando possíveis novos compostos com atividade biológica. A quantidade de composto marrom sintetizada pelo clone é uma função da composição do meio de cultivo e dos pHs inicias testados, o que sinaliza a possibilidade de otimização da produção. A solubilidade do composto marrom e das turbomicinas é diferencial em função da polaridade e do pH dos solventes testados, sugerindo margem para otimização da extração e purificação. O composto marrom produzido pelo clone M01 foi extraído e fracionado até a obtenção de formas purificadas das turbomicinas. A pureza relativa e identidade das moléculas foram confirmadas por TLC, MALDI-TOF e Q-TOF. A turbomicina A teve seu potencial antibacteriano avaliado, apresentando resultado positivo contra as estirpes Gram-positivas testadas.application/pdfDissertaçõesMetagenômicaCompostos bioativosAnálise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - DENNY MARCEL SECCON.pdfapplication/pdf2231409https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30062/1/R%20-%20D%20-%20DENNY%20MARCEL%20SECCON.pdfdc3ddec83b4a087a64b427cbb5b0cd4bMD51open accessTEXTR - D - DENNY MARCEL SECCON.pdf.txtR - D - DENNY MARCEL SECCON.pdf.txtExtracted Texttext/plain117128https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30062/2/R%20-%20D%20-%20DENNY%20MARCEL%20SECCON.pdf.txtb806964d890ba64ba287ebac0f313cacMD52open accessTHUMBNAILR - D - DENNY MARCEL SECCON.pdf.jpgR - D - DENNY MARCEL SECCON.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1261https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30062/3/R%20-%20D%20-%20DENNY%20MARCEL%20SECCON.pdf.jpgd7c2b490efc4035fa61cd969accdf0e8MD53open access1884/300622016-04-07 11:05:44.457open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/30062Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082016-04-07T14:05:44Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false |
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