Análise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativos

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Seccon, Denny Marcel
Data de Publicação: 2013
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: http://hdl.handle.net/1884/30062
Resumo: Resumo: Durante a prospecção por lipases em uma biblioteca metagenômica foram obtidos clones sem atividade lipolítica mas com fenótipo diferenciado visivelmente detectável. O clone M01, produtor de um composto marrom com alto rendimento mesmo em condições laboratoriais, foi investigado. O inserto foi quase totalmente sequenciado e, através de mutação, foi possível identificar que uma única ORF, homóloga a 4-hidroxifenilpiruvato dioxigenase (4-HPPD), conferia ao clone a capacidade de sintetizar o composto marrom. Nenhum outro gene relacionado foi encontrado, mas três ORFs encontradas codificando para proteases podem representar alvos de estudo com potencial biotecnológico. 4-HPPD é a segunda enzima da via catabólica da tirosina, convertendo hidroxifenilpiruvato (HPP) a homogentisato (HGA). Quando a produção é alta, HGA é excretado da célula, sofrendo auto-oxidação e auto-polimerização, gerando piomelanina, composto de coloração marrom. Em paralelo à produção de piomelanina e na presença de indol, através de um mecanismo ainda não desvendado, o organismo hospedeiro pode gerar duas moléculas coloridas com atividade antibiótica e citotóxica, turbomicina A e turbomicina B. Essas moléculas foram obtidas através de abordagem metagenômica apenas recentemente e são muito pouco estudadas, representando possíveis novos compostos com atividade biológica. A quantidade de composto marrom sintetizada pelo clone é uma função da composição do meio de cultivo e dos pHs inicias testados, o que sinaliza a possibilidade de otimização da produção. A solubilidade do composto marrom e das turbomicinas é diferencial em função da polaridade e do pH dos solventes testados, sugerindo margem para otimização da extração e purificação. O composto marrom produzido pelo clone M01 foi extraído e fracionado até a obtenção de formas purificadas das turbomicinas. A pureza relativa e identidade das moléculas foram confirmadas por TLC, MALDI-TOF e Q-TOF. A turbomicina A teve seu potencial antibacteriano avaliado, apresentando resultado positivo contra as estirpes Gram-positivas testadas.
id UFPR_d67666f117ebb0fe6c08622b58f96d90
oai_identifier_str oai:acervodigital.ufpr.br:1884/30062
network_acronym_str UFPR
network_name_str Repositório Institucional da UFPR
repository_id_str 308
spelling Seccon, Denny MarcelUniversidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciencias - BioquímicaFaoro, HelissonWassem, RoseliPedrosa, Fábio Oliveira, 1947-2013-08-06T15:03:15Z2013-08-06T15:03:15Z2013-08-06http://hdl.handle.net/1884/30062Resumo: Durante a prospecção por lipases em uma biblioteca metagenômica foram obtidos clones sem atividade lipolítica mas com fenótipo diferenciado visivelmente detectável. O clone M01, produtor de um composto marrom com alto rendimento mesmo em condições laboratoriais, foi investigado. O inserto foi quase totalmente sequenciado e, através de mutação, foi possível identificar que uma única ORF, homóloga a 4-hidroxifenilpiruvato dioxigenase (4-HPPD), conferia ao clone a capacidade de sintetizar o composto marrom. Nenhum outro gene relacionado foi encontrado, mas três ORFs encontradas codificando para proteases podem representar alvos de estudo com potencial biotecnológico. 4-HPPD é a segunda enzima da via catabólica da tirosina, convertendo hidroxifenilpiruvato (HPP) a homogentisato (HGA). Quando a produção é alta, HGA é excretado da célula, sofrendo auto-oxidação e auto-polimerização, gerando piomelanina, composto de coloração marrom. Em paralelo à produção de piomelanina e na presença de indol, através de um mecanismo ainda não desvendado, o organismo hospedeiro pode gerar duas moléculas coloridas com atividade antibiótica e citotóxica, turbomicina A e turbomicina B. Essas moléculas foram obtidas através de abordagem metagenômica apenas recentemente e são muito pouco estudadas, representando possíveis novos compostos com atividade biológica. A quantidade de composto marrom sintetizada pelo clone é uma função da composição do meio de cultivo e dos pHs inicias testados, o que sinaliza a possibilidade de otimização da produção. A solubilidade do composto marrom e das turbomicinas é diferencial em função da polaridade e do pH dos solventes testados, sugerindo margem para otimização da extração e purificação. O composto marrom produzido pelo clone M01 foi extraído e fracionado até a obtenção de formas purificadas das turbomicinas. A pureza relativa e identidade das moléculas foram confirmadas por TLC, MALDI-TOF e Q-TOF. A turbomicina A teve seu potencial antibacteriano avaliado, apresentando resultado positivo contra as estirpes Gram-positivas testadas.application/pdfDissertaçõesMetagenômicaCompostos bioativosAnálise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativosinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - DENNY MARCEL SECCON.pdfapplication/pdf2231409https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30062/1/R%20-%20D%20-%20DENNY%20MARCEL%20SECCON.pdfdc3ddec83b4a087a64b427cbb5b0cd4bMD51open accessTEXTR - D - DENNY MARCEL SECCON.pdf.txtR - D - DENNY MARCEL SECCON.pdf.txtExtracted Texttext/plain117128https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30062/2/R%20-%20D%20-%20DENNY%20MARCEL%20SECCON.pdf.txtb806964d890ba64ba287ebac0f313cacMD52open accessTHUMBNAILR - D - DENNY MARCEL SECCON.pdf.jpgR - D - DENNY MARCEL SECCON.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1261https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30062/3/R%20-%20D%20-%20DENNY%20MARCEL%20SECCON.pdf.jpgd7c2b490efc4035fa61cd969accdf0e8MD53open access1884/300622016-04-07 11:05:44.457open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/30062Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082016-04-07T14:05:44Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Análise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativos
title Análise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativos
spellingShingle Análise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativos
Seccon, Denny Marcel
Dissertações
Metagenômica
Compostos bioativos
title_short Análise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativos
title_full Análise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativos
title_fullStr Análise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativos
title_full_unstemmed Análise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativos
title_sort Análise de um clone metagenômico produtor de compostos potencialmente bioativos
author Seccon, Denny Marcel
author_facet Seccon, Denny Marcel
author_role author
dc.contributor.other.pt_BR.fl_str_mv Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciencias Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Ciencias - Bioquímica
Faoro, Helisson
Wassem, Roseli
dc.contributor.author.fl_str_mv Seccon, Denny Marcel
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Pedrosa, Fábio Oliveira, 1947-
contributor_str_mv Pedrosa, Fábio Oliveira, 1947-
dc.subject.por.fl_str_mv Dissertações
Metagenômica
Compostos bioativos
topic Dissertações
Metagenômica
Compostos bioativos
description Resumo: Durante a prospecção por lipases em uma biblioteca metagenômica foram obtidos clones sem atividade lipolítica mas com fenótipo diferenciado visivelmente detectável. O clone M01, produtor de um composto marrom com alto rendimento mesmo em condições laboratoriais, foi investigado. O inserto foi quase totalmente sequenciado e, através de mutação, foi possível identificar que uma única ORF, homóloga a 4-hidroxifenilpiruvato dioxigenase (4-HPPD), conferia ao clone a capacidade de sintetizar o composto marrom. Nenhum outro gene relacionado foi encontrado, mas três ORFs encontradas codificando para proteases podem representar alvos de estudo com potencial biotecnológico. 4-HPPD é a segunda enzima da via catabólica da tirosina, convertendo hidroxifenilpiruvato (HPP) a homogentisato (HGA). Quando a produção é alta, HGA é excretado da célula, sofrendo auto-oxidação e auto-polimerização, gerando piomelanina, composto de coloração marrom. Em paralelo à produção de piomelanina e na presença de indol, através de um mecanismo ainda não desvendado, o organismo hospedeiro pode gerar duas moléculas coloridas com atividade antibiótica e citotóxica, turbomicina A e turbomicina B. Essas moléculas foram obtidas através de abordagem metagenômica apenas recentemente e são muito pouco estudadas, representando possíveis novos compostos com atividade biológica. A quantidade de composto marrom sintetizada pelo clone é uma função da composição do meio de cultivo e dos pHs inicias testados, o que sinaliza a possibilidade de otimização da produção. A solubilidade do composto marrom e das turbomicinas é diferencial em função da polaridade e do pH dos solventes testados, sugerindo margem para otimização da extração e purificação. O composto marrom produzido pelo clone M01 foi extraído e fracionado até a obtenção de formas purificadas das turbomicinas. A pureza relativa e identidade das moléculas foram confirmadas por TLC, MALDI-TOF e Q-TOF. A turbomicina A teve seu potencial antibacteriano avaliado, apresentando resultado positivo contra as estirpes Gram-positivas testadas.
publishDate 2013
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2013-08-06T15:03:15Z
dc.date.available.fl_str_mv 2013-08-06T15:03:15Z
dc.date.issued.fl_str_mv 2013-08-06
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv http://hdl.handle.net/1884/30062
url http://hdl.handle.net/1884/30062
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPR
instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron:UFPR
instname_str Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron_str UFPR
institution UFPR
reponame_str Repositório Institucional da UFPR
collection Repositório Institucional da UFPR
bitstream.url.fl_str_mv https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30062/1/R%20-%20D%20-%20DENNY%20MARCEL%20SECCON.pdf
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30062/2/R%20-%20D%20-%20DENNY%20MARCEL%20SECCON.pdf.txt
https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/30062/3/R%20-%20D%20-%20DENNY%20MARCEL%20SECCON.pdf.jpg
bitstream.checksum.fl_str_mv dc3ddec83b4a087a64b427cbb5b0cd4b
b806964d890ba64ba287ebac0f313cac
d7c2b490efc4035fa61cd969accdf0e8
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
MD5
MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1813898868282097664