Loxoscelismo : avanços e desafios no desenho de fragmentos de anticorpos com potencial terapêutico

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silva, Sabrina Karim
Data de Publicação: 2019
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/71300
Resumo: Orientadora: Profa Dra. Larissa Magalhães Alvarenga
id UFPR_e0533e90ec81211537f0cb0bc443046a
oai_identifier_str oai:acervodigital.ufpr.br:1884/71300
network_acronym_str UFPR
network_name_str Repositório Institucional da UFPR
repository_id_str 308
spelling Silva, Sabrina KarimAlvarenga, Larissa MagalhãesFinco, Alessandra BeckerMoura, Juliana Ferreira de, 1975-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia2021-06-28T17:37:40Z2021-06-28T17:37:40Z2019https://hdl.handle.net/1884/71300Orientadora: Profa Dra. Larissa Magalhães AlvarengaCoorientadoras: Profa Dra. Alessandra Becker Finco; Profa Dra. Juliana Ferreira de MouraTese (doutorado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia. Defesa : Curitiba, 28/11/2019Inclui referências: p. 91-102Área de concentração: PatologiaResumo: Envenenamento por aranhas do gênero Loxosceles spp. (loxoscelismo) é um problema de saúde pública no Brasil, com mais de 6.000 casos por ano. O acidente é caracterizado por lesões dermonecróticas e/ou sistêmicas que, se não tratado de forma correta pode levar a sérios prejuízos inclusive a morte. O tratamento específico é baseado na administração do soro antiloxoscélico ou antiaracnídico. A produção do soro foi descrita há mais de um século e, apesar de eficaz trata-se de um método laborioso, que apresenta limitações importantes como a necessidade de altas quantidades de venenos brutos como imunógenos para os cavalos, o emprego de um grande número de animais, e seu uso pode implicar em reações adversas, dada a natureza heteróloga das imunoglobulinas. Atualmente, tem-se estudado o emprego de fragmentos de anticorpos recombinantes na terapia em diversas áreas da saúde humana, inclusive para envenenamento por serpentes e escorpiões. Fragmentos como scFv, diabody, minibody possuem baixa massa molecular, rápida difusão no tecido, estabilidade e são eficazes na neutralização, além de produzidos por diferentes sistemas de expressão. Nesse trabalho foram produzidos fragmentos de anticorpos humanizados que tiverem como template o monoclonal murino anti Loxosceles intermedia, LimAb7. A primeira geração de fragmentos produzidos, scFv15hLi7, manteve o perfil de reconhecimento da molécula de origem; porém, não foi capaz de neutralizar a atividade hemolítica in vitro do veneno. Tendo em vista que, a molécula parental liga-se próximo ao sítio ativo e, dessa forma poderia ocasionar impedimento estérico, foi inserida uma sequência que codifica CH3 a fim de aumentar o tamanho do fragmento. O minibody (scFv15h-CH3Li7) apresentou resultados mais promissores que o formato de scFv, mas manteve-se instável e com baixo rendimento de produção. As análises da sequência da primeira geração por docking sugeriram um deslocamento na interação com o antígeno e, com isso foram realizadas duas mutações reversas dando origem a segunda geração de fragmentos, scFv15hli7m e scFv5hLi7m (diabody). O scFv5hLi7m foi capaz de reconhecer o veneno e neutralizar os efeitos hemolíticos dependente ou não do sistema complemento, mesmo em concentrações altas da toxina; considerado então, promissor no tratamento de loxoscelismo.Abstract: Poisoning by Loxosceles spp. spiders (loxoscelism) is a public health problem in Brazil, with over 6,000 cases per year. The accident is characterized by dermonecrotic and / or systemic lesions that, if not treated correctly, can lead to serious damage including death. Specific treatment is based on administration of antiloxosceles or antiarachnic serum. Serum production has been described for over a century and, although effective, is a laborious method that has important limitations such as the need for high amounts of crude poisons as immunogens for horses, the use of a large number of animals, and their use may lead to adverse reactions given the heterologous nature of immunoglobulins. Currently, the use of recombinant antibody fragments in therapy in various areas of human health, including snake and scorpion poisoning, has been studied. Fragments such as scFv, diabody, minibody have low molecular mass, fast tissue diffusion, stability and are effective in neutralizing, and produced by different expression systems. In this work humanized antibody fragments having the murine monoclonal anti Loxosceles intermedia, LimAb7 as a template were produced. The first generation of fragments produced, scFv15hLi7, maintained the recognition profile of the source molecule, but was unable to counteract the in vitro hemolytic activity of the venom. Since the parent molecule binds near the active site and could thus cause steric hindrance, a sequence encoding CH3 was inserted to increase fragment size. The minibody (scFv15h- CH3Li7) showed more promising results than the scFv format, but remained unstable and with low yield. First generation sequence analysis by docking suggested a shift in interaction with the antigen, and two reverse mutations were performed, resulting in the second generation of fragments, scFv15hli7m and scFv5hLi7m (diabody). scFv5hLi7m was able to recognize the poison and neutralize the hemolytic effects dependente or not on the complement system, even at high toxin concentrations; considered promising in the treatment of loxoscelism.108 p. : il. (algumas color.).application/pdfImunoglobulinasImunologiaLoxoscelesParasitologiaLoxoscelismo : avanços e desafios no desenho de fragmentos de anticorpos com potencial terapêuticoinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - T - SABRINA KARIM SILVA.pdfapplication/pdf8775694https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/71300/1/R%20-%20T%20-%20SABRINA%20KARIM%20SILVA.pdfdac493e3fba65350ac62fc721d245d66MD51open access1884/713002021-06-28 14:37:40.131open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/71300Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082021-06-28T17:37:40Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Loxoscelismo : avanços e desafios no desenho de fragmentos de anticorpos com potencial terapêutico
title Loxoscelismo : avanços e desafios no desenho de fragmentos de anticorpos com potencial terapêutico
spellingShingle Loxoscelismo : avanços e desafios no desenho de fragmentos de anticorpos com potencial terapêutico
Silva, Sabrina Karim
Imunoglobulinas
Imunologia
Loxosceles
Parasitologia
title_short Loxoscelismo : avanços e desafios no desenho de fragmentos de anticorpos com potencial terapêutico
title_full Loxoscelismo : avanços e desafios no desenho de fragmentos de anticorpos com potencial terapêutico
title_fullStr Loxoscelismo : avanços e desafios no desenho de fragmentos de anticorpos com potencial terapêutico
title_full_unstemmed Loxoscelismo : avanços e desafios no desenho de fragmentos de anticorpos com potencial terapêutico
title_sort Loxoscelismo : avanços e desafios no desenho de fragmentos de anticorpos com potencial terapêutico
author Silva, Sabrina Karim
author_facet Silva, Sabrina Karim
author_role author
dc.contributor.other.pt_BR.fl_str_mv Alvarenga, Larissa Magalhães
Finco, Alessandra Becker
Moura, Juliana Ferreira de, 1975-
Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Microbiologia, Parasitologia e Patologia
dc.contributor.author.fl_str_mv Silva, Sabrina Karim
dc.subject.por.fl_str_mv Imunoglobulinas
Imunologia
Loxosceles
Parasitologia
topic Imunoglobulinas
Imunologia
Loxosceles
Parasitologia
description Orientadora: Profa Dra. Larissa Magalhães Alvarenga
publishDate 2019
dc.date.issued.fl_str_mv 2019
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2021-06-28T17:37:40Z
dc.date.available.fl_str_mv 2021-06-28T17:37:40Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/doctoralThesis
format doctoralThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/1884/71300
url https://hdl.handle.net/1884/71300
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 108 p. : il. (algumas color.).
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPR
instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron:UFPR
instname_str Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron_str UFPR
institution UFPR
reponame_str Repositório Institucional da UFPR
collection Repositório Institucional da UFPR
bitstream.url.fl_str_mv https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/71300/1/R%20-%20T%20-%20SABRINA%20KARIM%20SILVA.pdf
bitstream.checksum.fl_str_mv dac493e3fba65350ac62fc721d245d66
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1813898674183340032

Registros relacionados