Padronização e aplicação de metodologias moleculares para avaliar o efeito da temperatura e pH na expressão da vitelogenina metalotioneína em Danio rerio

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Pozzan, Roberta, 1995-
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFPR
Texto Completo: https://hdl.handle.net/1884/71714
Resumo: Orientador: Prof. Dr. Ciro Alberto de Oliveira Ribeiro
id UFPR_ebffaa54a4bf027967c8c6fd686b6721
oai_identifier_str oai:acervodigital.ufpr.br:1884/71714
network_acronym_str UFPR
network_name_str Repositório Institucional da UFPR
repository_id_str 308
spelling Pozzan, Roberta, 1995-Souza, Claudemir de, 1978-Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e MolecularRibeiro, Ciro Alberto de Oliveira, 1960-2021-08-17T19:42:31Z2021-08-17T19:42:31Z2021https://hdl.handle.net/1884/71714Orientador: Prof. Dr. Ciro Alberto de Oliveira RibeiroCoorientador: Dr. Claudemir de SouzaDissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular. Defesa : Curitiba, 31/03/2021Inclui referências: p. 81-95Resumo: Os estudos de qualidade de água são um grande desafio para a manutenção dos ambientes naturais e da biodiversidade, e as buscas por novas ferramentas são necessárias para atender a essa demanda ambiental. As proteínas metalotioneína (MT) e vitelogenina (VTG) são dois importantes biomarcadores de exposição a poluentes, expressas em peixes quando expostos a metais tóxicos e substâncias estrogênicas, respectivamente. Para investigar se alterações nos parâmetros físicos e químicos interferem na expressão dessas proteínas, e validar sua posterior utilização em biomonitoramento ambiental, exemplares adultos de Danio rerio foram mantidos em laboratório sob diferentes temperaturas e pHs, por 4d, 10d, 15d e 20d. Após a exposição, os espécimes foram eutanasiados e preservados a -80oC, homogeneizados e o extrato centrifugado e preservado para análises posteriores. A concentração de proteínas totais foi estimada por espectofotometria, a 280nm. Frações solúveis resultantes do homogenato foram analisadas pelo ensaio de ELISA quantitativo. Análises de expressão gênica foram realizadas por rt-qPCR, utilizando oligonucleotídeos iniciadores gerados com base na sequência nucleotídica das proteínas MT e VTG de D. rerio, obtidas no GenBank. A expressão dos genes endógenos Fator de Alongamento e Carreador de Soluto 25? foram utilizadas para normalizar os dados, através do método delta-delta Ct. Os resultados foram analisados estatisticamente para determinar se esses fatores físicos e químicos interferem nesses biomarcadores, permitindo uma melhor interpretação de avaliações da qualidade da água com base em seu uso. Nos ensaios de ELISA, não foram constatadas diferenças significativas na concentração de VTG em nenhum dos tratamentos; em relação à proteína MT também não foram observadas diferenças significativas em relação às diferentes temperaturas testadas. Entretanto, os grupos submetidos a pH extremos (9,0 e 5,0) mostraram diferenças significativas no conteúdo de MT em relação ao grupo controle nos dias 10 e 15 de exposição, recuperando os valores no 20º dia de exposição. A expressão gênica de ambas as proteínas também não mostrou diferenças significativas entre os tratamentos para machos e fêmeas (exceto machos submetidos aos pHs ao 20º dia, que diminuíram sua expressão de MT). Já entre machos e fêmeas, os únicos grupos que se mostraram diferentes foram as fêmeas submetidas à 25ºC e a pH 5,0, para VTG, em relação aos machos controle destes tratamentos. Através destes resultados pode-se concluir que essas proteínas constituem biomarcadores confiáveis em D. rerio, uma vez que não aumentam sua expressão gênica ou proteica com a variação da temperatura e pH testados. Palavras Chaves: biomarcadores, imunodetecção, parâmetros físicos e químicos, bioensaios, peixe-zebra.Abstract: Water quality studies are a major challenge for the maintenance of natural environments and biodiversity, and searches for new tools are needed to attend this environmental demand. The proteins metallothionein (MT) and vitellogenin (VTG) are two important biomarkers of exposure to pollutants, expressed in fish when exposed to toxic metals and estrogenic substances, respectively. To investigate whether changes in physical and chemical parameters interfere with the expression of these proteins, and validate its subsequent use in environmental biomonitoring, adult specimens of Danio rerio were kept in the laboratory under different temperatures and pHs, for 4d, 10d, 15d and 20d. After exposure, the specimens were euthanized and preserved at -80ºC, homogenized and the extract was centrifuged and preserved for further analysis. The concentration of total proteins was estimated by spectrophotometry, at 280nm. Soluble fractions resulting from the homogenate were analyzed by the quantitative ELISA assay. Gene expression analysis were performed by rt-qPCR, using primers generated based on the nucleotide sequence of the MT and VTG proteins of D. rerio, obtained from GenBank. The expression of the endogenous Stretching Factor and Solute Carrier 25? genes were used to normalize the data, using the delta-delta Ct method. The results were analyzed statistically to determine whether these physical and chemical factors interfere with these biomarkers, allowing a better interpretation of water quality assessments based on their use. In the ELISA assays, no significant differences were found in the concentration of VTG in any of the treatments; in relation to the MT protein, no significant differences were also observed in relation to the different temperatures tested. However, the groups submitted to extreme pH 9.0 and 5.0 showed significant differences in the MT content in relation to the control group on days 10 and 15 of exposure, recovering the values on the 20th day of exposure. Gene expression of both proteins also showed no significant differences between treatments for males and females (except males submitted to pHs on the 20th day, which decreased their MT expression). Among males and females, the only groups that were different were females submitted to 25ºC and pH 5.0, about VTG, in relation to the control males of these treatments. Through these results it can be concluded that these proteins are reliable biomarkers in D. rerio, since they do not increase their gene or protein expression with the tested temperature and pH variation. Keywords: biomarkers, immunodetection, physical and chemical parameters, bioassays, zebrafish.1 arquivo (106 p.) : il. (algumas color.).application/pdfBiomarcadoresBioensaioPeixes - PesquisaÁgua - AnáliseVitelogeninasProteínas - AnáliseMorfologiaPadronização e aplicação de metodologias moleculares para avaliar o efeito da temperatura e pH na expressão da vitelogenina metalotioneína em Danio rerioinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisporreponame:Repositório Institucional da UFPRinstname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)instacron:UFPRinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINALR - D - ROBERTA POZZAN.pdfapplication/pdf5501489https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/71714/1/R%20-%20D%20-%20ROBERTA%20POZZAN.pdf18bd55c2dca88c0cce7b4f57d042cd3cMD51open access1884/717142021-08-17 16:42:31.629open accessoai:acervodigital.ufpr.br:1884/71714Repositório de PublicaçõesPUBhttp://acervodigital.ufpr.br/oai/requestopendoar:3082021-08-17T19:42:31Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)false
dc.title.pt_BR.fl_str_mv Padronização e aplicação de metodologias moleculares para avaliar o efeito da temperatura e pH na expressão da vitelogenina metalotioneína em Danio rerio
title Padronização e aplicação de metodologias moleculares para avaliar o efeito da temperatura e pH na expressão da vitelogenina metalotioneína em Danio rerio
spellingShingle Padronização e aplicação de metodologias moleculares para avaliar o efeito da temperatura e pH na expressão da vitelogenina metalotioneína em Danio rerio
Pozzan, Roberta, 1995-
Biomarcadores
Bioensaio
Peixes - Pesquisa
Água - Análise
Vitelogeninas
Proteínas - Análise
Morfologia
title_short Padronização e aplicação de metodologias moleculares para avaliar o efeito da temperatura e pH na expressão da vitelogenina metalotioneína em Danio rerio
title_full Padronização e aplicação de metodologias moleculares para avaliar o efeito da temperatura e pH na expressão da vitelogenina metalotioneína em Danio rerio
title_fullStr Padronização e aplicação de metodologias moleculares para avaliar o efeito da temperatura e pH na expressão da vitelogenina metalotioneína em Danio rerio
title_full_unstemmed Padronização e aplicação de metodologias moleculares para avaliar o efeito da temperatura e pH na expressão da vitelogenina metalotioneína em Danio rerio
title_sort Padronização e aplicação de metodologias moleculares para avaliar o efeito da temperatura e pH na expressão da vitelogenina metalotioneína em Danio rerio
author Pozzan, Roberta, 1995-
author_facet Pozzan, Roberta, 1995-
author_role author
dc.contributor.other.pt_BR.fl_str_mv Souza, Claudemir de, 1978-
Universidade Federal do Paraná. Setor de Ciências Biológicas. Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular
dc.contributor.author.fl_str_mv Pozzan, Roberta, 1995-
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv Ribeiro, Ciro Alberto de Oliveira, 1960-
contributor_str_mv Ribeiro, Ciro Alberto de Oliveira, 1960-
dc.subject.por.fl_str_mv Biomarcadores
Bioensaio
Peixes - Pesquisa
Água - Análise
Vitelogeninas
Proteínas - Análise
Morfologia
topic Biomarcadores
Bioensaio
Peixes - Pesquisa
Água - Análise
Vitelogeninas
Proteínas - Análise
Morfologia
description Orientador: Prof. Dr. Ciro Alberto de Oliveira Ribeiro
publishDate 2021
dc.date.accessioned.fl_str_mv 2021-08-17T19:42:31Z
dc.date.available.fl_str_mv 2021-08-17T19:42:31Z
dc.date.issued.fl_str_mv 2021
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv https://hdl.handle.net/1884/71714
url https://hdl.handle.net/1884/71714
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 1 arquivo (106 p.) : il. (algumas color.).
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFPR
instname:Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron:UFPR
instname_str Universidade Federal do Paraná (UFPR)
instacron_str UFPR
institution UFPR
reponame_str Repositório Institucional da UFPR
collection Repositório Institucional da UFPR
bitstream.url.fl_str_mv https://acervodigital.ufpr.br/bitstream/1884/71714/1/R%20-%20D%20-%20ROBERTA%20POZZAN.pdf
bitstream.checksum.fl_str_mv 18bd55c2dca88c0cce7b4f57d042cd3c
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv MD5
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFPR - Universidade Federal do Paraná (UFPR)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1813898848071843840

Registros relacionados