HAND2 : um alvo na susceptibilidade à embriopatia da talidomida

• Autor(a) principal: Rengel, Bruna Duarte
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/236951
• topic: Talidomida; Teratogênese; Cardiopatias; Anomalias congênitas; Fatores de transcrição; Thalidomide; Congenital heart disease; Congenital abnormalities; HAND2; Teratogenesis

A talidomida foi um marco na teratologia, mas ainda não se conhecem por completo os mecanismos que dão origem à embriopatia da talidomida (TE). A TE é caracterizada por um conjunto de malformações que envolvem principalmente membros, coração, olhos e orelhas. Embora seja um dos mais potentes teratógenos, nem todos os bebês expostos à talidomida apresentam malformações, sendo a constituição genética um dos fatores que influenciam o aparecimento das anomalias. Recentemente, um estudo observou a presença de uma nova ligação entre a talidomida e T-box 5 (TBX5), além de uma forte interação entre Heart and Neural Crest Derivatives 2 (HAND2) e TBX5, sendo que essa interação foi perturbada na presença de talidomida. HAND2 é um fator de transcrição envolvido no desenvolvimento, principalmente, do coração e membros, e é codificado pelo gene HAND2 o qual possui dois éxons e está localizado no cromossomo 4. O objetivo deste trabalho foi avaliar o papel do gene HAND2 na susceptibilidade genética à TE. Extraiu-se o DNA de amostras de saliva de 35 indivíduos portadores da TE e realizou-se a técnica de reação em cadeia da polimerase (PCR) para amplificação e sequenciamento das regiões de interesse do gene HAND2. As análises in silico foram realizadas para inferir o impacto das variantes na proteína. Os programas PredictSNP2 e MutationTaster foram utilizados para predições de efeito das variantes na proteína; Human Splicing Finder para sítios de splicing; miRBase para sítios de miRNA; MethPrimer para alterações em ilhas CpG; Enhancer Atlas 2.0 para sítios de reforçadores; e pacote de R motifbreakR para alterações em sítio de fatores de transcrição. As análises estatísticas foram executadas utilizando o software SPSS v 18. Dentre os indivíduos avaliados, todos apresentaram anomalias de membros, sendo 96% de membro superior e 48% de inferior. Além disso, 12% apresentaram anomalias congênitas cardíacas e 52% apresentaram efeitos tardios cardíacos. Foi identificada uma variante polimórfica sinônima p.P51 (rs59621536) no éxon 1 e nenhuma variante no éxon 2. A variante p.P51 esteve presente em três indivíduos dentre os 31 analisados para o éxon 1. As frequências genotípicas e alélicas foram diferentes entre o grupo TE e a amostra de referência (banco de dados GnomAD) (p=0,005; p=0,003, respectivamente). Nas análises in silico, a variante foi classificada como neutra, sem alteração em sítios de splicing e sítios de miRNA, estando localizada também na região promotora de HAND2-AS1. Foi indicada alteração de duas ilhas CpG adjacentes à variante, juntamente com alteração dos sítios de ligação de MECP2 (proteína ligadora de CpG-metil 2) e PLAG1 (proteína do gene de adenoma pleomórfico 1). A variante p.P51 apesar de não ter sido relacionada com alterações a nível proteico neste estudo, levou a alteração de duas ilhas CpG, além de modificar o sítio de ligação de MECP2, uma proteína importante na regulação de sequências metiladas. Dessa forma, p.P51 pode atuar modificando a regulação do gene HAND2 a nível epigenético. HAND2, por atuar no desenvolvimento de membros e coração, pode estar envolvido nos mecanismos de teratogênese da talidomida representando uma conexão entre as malformações de membros e coração observadas.