Análise da difusão celular em linhagens com potencial metastático

• Autor(a) principal: Krug, Monique Siebra
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/78075
• topic: Neoplasias; Metástase neoplásica; Cancer; EMT; Cell mobility; Cell culture; Microscopy

Câncer é a segunda maior causa de morte atualmente, perdendo apenas para doenças cardiovasculares. A maior parte dos pacientes que vem a óbito decorrente de algum tipo de câncer apresentou metástase de um ou mais tumores primários. Dessa forma, estudar o pro-cesso que leva à metástase e que decorre dele é essencial para que se possa aumentar o índice de cura desses pacientes. Para que ocorra metástase, as células cancerosas devem passar pela Transição Epitélio-Mesenquimal (EMT, do inglês Epithelial-Mesenquimal Transition), a qual confere mobilidade às células, de modo que possam migrar para novos sítios, invadir outros tecidos e estabelecer focos de tumor secundários. Para poder caracterizar a invasividade de linhagens celulares, vários estudos foram pro-postos, com o intuito de correlacionar a 'mesenquimalidade' (e consequente capacidade de entrar em metástase) dessas linhagens. O objetivo desse trabalho é propor uma caracterização de linhagens celulares a partir da difusividade, dimensão fractal e do processo de agregação apresentadas por culturas de células in vitro, para então correlacionar essas medidas com o perfil mesenquimal (previamente descrita na literatura) de cada linhagem. A linhagem celular escolhida foi a MCF7 (câncer de mama de Homo sapiens), que tem capacidade de invasão moderada e crescimento normal. As células foram cultivadas em meio DMEM Low-Glucose, suplementadas com soro fetal bovino a 10% e antibiótico (Ampicilina e Streptomicina) a 1% e foram mantidas em estufa a 37°C a 5% de CO2. Para a aquisição de ima-gens, foi adicionado ao meio de cultura HEPES 20mM para que o meio se mantivesse tampo-nado. As imagens foram obtidas durante intervalos de tempo que variaram de 20 a 70 horas, com as objetivas de 10x e 20x. A aquisição de imagens foi feita por microscópio óptico inverti-do e pelo programa QCapture Pro. O processamento de imagens foi feito pelo programa Ima-geJ. As células apresentaram-se não como um sistema difusivo, mas como um sistema onde as células apresentam um movimento direcionado, acelerado não uniformemente, dentro dos intervalos de tempo observados. Os agregados formados se fusionaram com o passar do tem-po, com a tendência de formar agregados cada vez maiores e em menor número. Por fim, a-gregados de células com variação gradual de tamanho mostraram-se mais fractais que outros, sendo que imagens contendo agregados muito desiguais apresentaram dimensão fractal me-nor. Analisando os resultados obtidos, a explicação é focada na complexidade das culturas, além da heterogeneidade entre as células. O ensaio provou ser válido para indicar o perfil me-senquimal de uma linhagem, entretanto mais experimentos em condições iguais, assim como em condições diferentes devam ser feitos para uma validação adequada.