Efeito da microcistina-lr em parâmetros de dano oxidativo em caenorhabditis elegans : efeito protetor da luteína

• Autor(a) principal: Brasil, Allana Von Sulzback
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/202109
• topic: Antioxidantes; Radicais livres; Microcistinas; Caenorhabditis elegans; Biomarcadores; Estresse oxidativo; Luteína; Antioxidants; Cyanotoxins; Free radicals; Carotenoids

O aumento da atividade urbana e industrial, concomitante ao aumento de temperatura, geram um processo denominado eutrofização dos sistemas aquáticos. Tal processo tem como principal consequência a rápida proliferação de cianobactérias no ambiente aquático, conhecida como ―floração‖ ou ―bloom‖. Algumas espécies de cianobactérias têm a capacidade de produzir metabólitos secundários que geram sabor e odor desagradáveis à água, além de produzir poderosas toxinas (cianotoxinas). Tais cianotoxinas causam graves injúrias a animais terrestres, aquáticos e humanos, através da ingestão ou contato com a água contaminada e/ou alimentos irrigados com a mesma. As microcistinas (MIC) são as cianotoxinas mais comumente encontradas em florações e levam a uma por hemorragia hepática, sendo seus mecanismos de toxicidade ligados ao estresse oxidativo. Neste trabalho avaliou-se o efeito de doses ambientalmente importantes de MIC-LR sobre marcadores de estresse oxidativo e taxa de sobrevivência no nematoide Caenorhabditis elegans (C. elegans), um modelo alternativo ao uso de animais de experimentação. Foi investigado, adicionalmente, o possível efeito protetor do carotenoide luteína (LUT). Pétalas de Tagetes foram utilizadas para obtenção da LUT, sendo o grau de pureza, verificado através de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Foram utilizadas cepas de C.elegans mantidas a 20º C com E. Coli em meio de crescimento NGM. No processo de tratamento empregaram-se larvas hermafroditas gravídicas para realização da sincronização e posterior eclosão de ovos. Os nematoides foram tratados com MIC-LR nas concentrações de 1, 10, 100, 250 e 500 μg/L e separadamente com LUT nas concentrações de 5, 10, 50, 100 e 250 μM por 30 minutos a 20°C. Em seguida, os nematoides foram submetidos às análises de geração de espécies reativas de oxigênio (EROs), níveis de substancias reativas ao acido tiobarbitúrico (TBARS) como indicador de peroxidação lipídica, bem como expressão das enzimas antioxidantes superóxido dismutase (SOD) e catalase (CAT). Adicionalmente foram avaliados taxa de sobrevivência e área corporal dos nematoides. Os nematoides foram pré-expostos a LUT 5μM (concentração não tóxica) durante 30 minutos e após, expostos a MIC-LR 500 μg/L (concentração que induziu maior toxicidade) por 30 minutos a 20°C. Os resultados indicaram que concentrações de 1-100 μg/L não causaram alterações significativas na área corporal, taxa de sobrevivência e geração de EROs. Entretanto, todas as concentrações de MIC-LR mostraram-se diferentes do controle na expressão de SOD. Somente as concentrações de 250 e 500 μg/L foram diferentes do controle quanto a taxa de sobrevivência e geração de EROS. Para expressão de CAT, somente a concentração de 500 μg/L mostrou-se diferente do controle. A LUT extraída apresentou pureza de 92% e foi capaz de prevenir os danos causados pela MIC-LR na geração de EROs, texa de sobrevivência e expressão da CAT. O pré-tratamento com LUT não foi capaz de prevenir as alterações causadas na expressão da SOD. Estes dados sugerem que a MIC-LR, uma conhecida hepatotoxina, exerce toxicidade mesmo em um invertebrado desprovido de fígado e que eventos oxidativos estão envolvidos nessa resposta. O carotenoide LUT preveniu os danos oxidativos causados pela MIC-LR e aparece como uma alternativa para mitigar os efeitos desta intoxicação.