Determinação da densidade celular da cianobactéria Microcystis aeruginosa por espectrofotometria : validação de um método para uso em pesquisa

• Autor(a) principal: Costa, Pedro Beschoren da
• Data de Publicação: 2009
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/18407
• topic: Contagem de células; Meio de cultura; Microcystis aeruginosa; Espectrofotometria; Quantification; NPLJ-4; Cell counting; Sedgwick-rafter; Culture medium

A pesquisa em cianobactérias é intensa e tem progredido muito com o desenvolvimento de novas tecnologias e técnicas. Em projetos envolvendo culturas de cianobactérias, sua quantificação precisa e exata é imprescindível, pois diversos aspectos de sua biologia dependem de sua densidade celular. Neste trabalho estabeleceu-se um método espectrofotométrico de contagem rápida e eficiente, para ser aplicado a culturas da cianobactéria tóxica Microcystis aeruginosa, da cepa brasileira NPLJ-4, para uso em pesquisa. No espectrofotômetro de UV Cary-1E foram feitas medições de absorbância no pico de absorção da amostra, determinado experimentalmente a 436nm. A matriz utilizada (branco) foi o meio de cultura ASM- 1, uma solução de 0,4% de diferentes sais. As absorbâncias foram correlacionadas com os resultados de contagens de células em câmera de Sedgwick-Rafter, em diferentes faixas de trabalho, tanto em análises de correlação linear como de potência. A avaliação dos resultados foi realizada através de gráficos de perfil de resíduos, que demonstram se há tendência nas predições das equações geradas em cada correlação. A regressão linear, quando separada em altas e baixas concentrações celulares, mostrou-se a mais precisa. As equações de regressão x= (y/4.10-8) - 0,0357 e x= (y/7.10-8) + 0,0012 mostram qual é o número esperado de células, em altas e baixas concentrações (respectivamente), para uma absorbância y. A equação na faixa de altas concentrações deve ser utilizada para densidades acima de 1.230.000 células.mL-1, o que equivale a um valor de absorbância 0,0850, sendo valores de concentração celular e absorbância mais baixos melhor preditos pela equação de baixas concentrações. Também foram determinados os limites de detecção e quantificação do novo método. Os resultados esperados pelas equações e observados nas contagens foram avaliados através de um teste F, que mostrou que as variâncias não diferem (Fcalc=1,90< F0,05;6;6=5,82 para os resultados das equações de maiores concentrações e Fcalc=1,68< F0,05;6;6=5,82 para os resultados das equações de menores concentrações). Conclui-se que os resultados esperados das equações são similares aos resultados das contagens, comprovando que o novo método está validado e pode ser aplicado eficientemente. Este método, apesar de estar restrito a apenas uma linhagem tóxica, é muito mais ágil do que o método de quantificaçõa em câmara de Sedgwick-Rafter, mostrando-se muito promissor e de grande utilidade para a pesquisa.