Modelo de fecundação in vitro de oócitos bovinos sem zona pelúcida

• Autor(a) principal: Kohler, Louise Fontoura
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/272002
• topic: Reprodução animal; Fertilização in vitro; Capacitação espermática; Reação acrossômica; Bovinos; Equinos; Sperm capacitation; Acrosome reaction; In vitro fertilization; Bovine; Equine

A capacitação (CA) e a reação acrossômica (RA) são fenômenos espermáticos essenciais para a fecundação do oócito em mamíferos, e podem ser reproduzidos in vitro. Este estudo teve como objetivo avaliar as taxas de fecundação in vitro (FIV) de oócitos bovinos com e sem zona pelúcida (ZP) utilizando espermatozoides bovinos após a indução da CA e RA in vitro, como modelo para aplicação em outras espécies mamíferas. Para tanto, complexos cumulus-oócito (CCOs) foram maturados in vitro (MIV) por 24 h, e após 18 h, um grupo de CCOs foi desnudado e oócitos maturos foram submetidos à remoção enzimática da ZP, enquanto outro grupo foi ativado partenogeneticamente com uso de ionomicina. Sêmen bovino foi descongelado a 37°C por 50 s e centrifugado em gradiente de Mini-Percoll. Os espermatozoides foram capacitados em meio sem ou com 10 UI/mL de heparina por 2 h. Após 15 min, uma fração dos espermatozoides foi submetida à indução da RA após exposição a uma solução de cálcio Ionóforo (1 μM) em PBSm. As taxas de CA e RA, e a viabilidade espermática (VE) foram avaliadas pelas colorações de clortetraciclina, e de azul de Tripano e Giemsa, respectivamente. A FIV foi realizada após 24 h de MIV com espermatozoides capacitados (oócitos com ZP, grupo FIV) ou reagidos (oócitos sem ZP, grupo FIV ZF). Após 18 h de FIV ou ativação, todas as estruturas foram coradas com bisbenzimida (15 μg/mL) para avaliação da configuração da cromatina. As taxas de CA, RA e de VE foram de 43%, 29% e 84%, respectivamente. As taxas de fecundação não diferiram entre os grupos de FIV e FIV ZF, e tais taxas não diferiram da taxa de ativação dos oócitos paternotos, utilizados como controle (40, 44 e 47%, respectivamente). No entanto, as taxas de polispermia foram mais altas entre os oócitos com zona pelúcida em comparação com os oócitos sem zona (12 e 2%, respectivamente, p≥0,05). Parte das estruturas foi colocada em cultivo para avaliação da clivagem, não havendo diferença entre os grupos FIV e FIV ZF (53 e 64%, respectivamente). Concluímos que o modelo de oócitos bovinos sem ZP permite a FIV monospérmica, com baixa taxa de polispermia, ainda necessitando de ajustes no protocolo. Como perspectiva, este modelo deverá ser utilizado no futuro para a FIV interespécies, como para a espécie equina.