Revisão das principais técnicas e proposição de metodologia para produção heteróloga da proteína inibidora de tripsina do tipo kunitz, rica em metioninas (KTIMet), derivada de soja [Glycine max (L.) Merrill] em Escherichia coli

• Autor(a) principal: Giustina Neto, José André Della
• Data de Publicação: 2023
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/258686
• topic: Metionina; Soja; Proteínas recombinantes; Inibidores de proteases; Escherichia coli

A expressão heteróloga de genes em microrganismos é ferramenta importante da biotecnologia pois representa ciclo produtivo mais rápido, econômico e eficaz quando comparado a métodos para obtenção das proteínas codificadas a partir dos organismos de origem. No entanto, a diversidade de técnicas disponíveis na literatura evidencia a necessidade de utilizar critérios para a seleção do sistema de expressão microbiano mais adequado em cada caso. Neste trabalho, foram estudados alguns dos métodos descritos na literatura científica e apresentados os critérios que permitiram a seleção da metodologia proposta. Para exemplificar as escolhas realizadas durante a elaboração desta monografia, foi utilizada uma proteína recombinante concebida em estágios de graduação e durante o trabalho de mestrado do autor. Trata-se da denominada KTIMet, versão sintética de um inibidor de tripsina do tipo Kunitz enriquecida em metioninas originalmente derivada de soja [Glycine max (L.) Merrill]. As principais considerações para a definição da melhor metodologia de produção de KTIMet foram: (I) viabilidade da síntese de proteína recombinante enriquecida em metioninas por bactérias; (II) viabilidade da expressão heteróloga de gene codificador de proteína vegetal inibidora de protease em bactérias; e (III) testar a hipótese levantada em análise in silico quanto à redução da atividade inibitória em comparação com a proteína nativa. Foram, assim, propostos métodos para a expressão gênica em Escherichia coli, a extração de proteínas e a purificação de KTIMet. Esta monografia poderá auxiliar na continuidade das pesquisas referentes à esta proteína, validando os pressupostos originais relacionados às vantagens de sua incorporação no conjunto de proteínas da soja quanto aos ganhos nutricionais deste grão, os quais são de grande relevância econômica no cenário da indústria de alimentos.