Identificação e caracterização de vesículas extracelulares presentes no líquido hidático de Echinococcus granulosus

• Autor(a) principal: Battistella, Maria Eduarda
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/170113
• topic: Echinococcus granulosus; Hidatidose

Helmintos da classe Cestoda são endoparasitos obrigatórios de grande importância no mundo. Algumas espécies do gênero Echinococcus são agentes etiológicos de doenças em humanos e animais domésticos, necessitando de atenção considerável. Hospedeiros intermediários, humanos e ungulados, são afetados pela formação do cisto hidático, estrutura esférica preenchida pelo líquido hidático (LH), formado principalmente no fígado e pulmão. O processo de infecção apresenta diversos mecanismos adaptativos que envolvem a sobrevivência do parasito dependendo da interação molecular entre o parasito e o hospedeiro. Estudos anteriores já demonstraram a presença de proteínas, tanto do hospedeiro quanto do parasito, no LH. Além disso, proteínas sem sinal para exportação foram identificadas no LH e em meio de cultura de protoescólices. Com esses dados, nossa hipótese é que tais proteínas sejam transportadas via vesículas extracelulares (VEs). Este estudo foca no isolamento e caracterização de VEs de LH de cistos férteis e inférteis de Echinococcus granulosus. As VEs foram purificadas por uma série de centrifugações para remoção de restos celulares seguida de duas ultracentrifugações a 100.000 g. Immunoblot, com anticorpos específicos contra enolase e 14-3-3 de Echinococcus spp., foi conduzido para verificar a presença de proteínas que são encontradas frequentemente em VEs e para identificação da proteína fetuína-A do hospedeiro. Uma vez que nossos dados reforçaram nossa hipótese da existência de VEs em LH, conduzimos experimentos de análise das amostras por microscopia eletrônica de transmissão, com o qual foi possível identificar estruturas esféricas “exosome-like”. Baseado na quantidade de proteínas do hospedeiro, como albumina e imunolobulinas, amostras de LH foram selecionadas de cistos hidáticos férteis e inférteis por gel de poliacrilamida (SDS-PAGE). Nestas amostras, a presença da fetuína-A foi analisada por experimentos de immunoblot e immunogold. Posteriormente, as proteínas enolase e 14-3-3 também foram identificadas em experimentos de immunoblot e immunogold. Estudos recentes indicam que VEs são importantes para a relação parasito-hospedeiro. Estudos posteriores baseado em proteômica, para identificar a composição das VEs e a função da fetuína-A no LH, são necessários para elucidar suas importâncias na interação parasito-hospedeiro.