Caracterização imunológica e funcional da sinal-peptidase tipo I de Mycoplasma hyopneumoniae

• Autor(a) principal: Paes, Jéssica Andrade
• Data de Publicação: 2012
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/196918
• topic: Mycoplasma hyopneumoniae; Mycoplasma hyopneumoniae; MhSPase I; Immunological characterization; Functional activity; Recombinant vaccines

Mycoplasma hyopneumoniae é um patógeno suíno economicamente significante que se adere às células do epitélio respiratório causando a pneumonia enzoótica suína (PES). A adesão celular e outros processos importantes para infecção dependem de proteínas de membrana, cuja maioria é transportada pela via de exportação Sec-dependente. A sinal-peptidase tipo I (SPase I) é uma protease de membrana que atua na liberação de proteínas translocadas através da via Sec-dependente. Neste contexto, a SPase I possui participação crítica na exportação de proteínas que podem atuar nas relações patógeno-hospedeiro. O objetivo deste trabalho é caracterizar imunológica e funcionalmente a SPase I de M. hyopneumoniae (MhSPase I) a fim de analisar o seu potencial para o desenvolvimento de vacinas recombinantes contra a PES. Para isso, a sequência de DNA codificadora da MhSPase I, sipS, foi clonada no vetor de expressão pGEX 4T-3 e expressa em Escherichia coli. A MhSPase I recombinante (rMhSPase I) foi purificada e utilizada em ensaios de imunização de camundongos. A rMhSPase I foi altamente imunogênica para camundongos, sendo que sua imunogenicidade foi avaliada por ELISA. A resposta imune celular induzida pela rMhSPase I foi caracterizada através da secreção de citocinas no cultivo de esplenócitos dos camundongos imunizados, sendo estimulados com a proteína recombinante. Este antígeno induziu uma forte resposta celular do tipo Th2, com altos níveis de secreção de interleucina10. Paralelamente, a atividade funcional da rMhSPase I foi analisada através de ensaios de complementação in vivo em E. coli SPase I mutante. A partir deste ensaio, pode-se observar que a MhSPase I é capaz de complementar a atividade de SPase I de E. coli, garantindo a sobrevivência bacteriana, sendo uma proteína essencial para a viabilidade celular. Estes resultados demonstram que a rMhSPase I pode ser um bom alvo para o desenvolvimento de vacinas recombinantes contra a PES, uma vez que é capaz de induzir resposta imune e é fundamental para a sobrevivência bacteriana.