Análise da expressão de uma cromodomínio-helicase no parasito cestódeo Mesocestoides corti

• Autor(a) principal: Costa, Caroline Borges
• Data de Publicação: 2011
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/49206
• topic: Mesocestoides corti; Mesocestoides corti; Chromodomain-helicase; Differential expression; cDNA

Mesocestoides corti é um platelminto endoparasita utilizado como modelo experimental para o estudo da classe cestoda, a qual abriga também os gêneros Echinococcus e Taenia, ambos de grande importância médica e veterinária. M. corti é considerado um cestódeo-modelo, pois, entre outras vantagens, pode ser mantido in vivo, em hospedeiros experimentais, e cultivado in vitro. Pouco ainda é sabido sobre os mecanismos moleculares envolvidos no processo de estrobilização de cestódeos. Assim, o objetivo geral deste trabalho é estudar uma cromodomínio-helicase diferencialmente expressa durante este processo em M. corti. Em estudos anteriores, nosso grupo construiu bibliotecas de cDNA enriquecidas com sequências diferencialmente expressas em larvas (tetratirídeos) e vermes segmentados e, delas, foram selecionadas para estudo sequências de cDNAs correspondentes a genes conservados relacionados ao desenvolvimento. Um dos cDNAs selecionados codifica parte de uma cromodomínio-helicase (McCHD), com ortólogos envolvidos em processos de remodelagem de cromatina e controle da expressão gênica em diferentes espécies eucarióticas. A sequência parcial da McCHD foi amplificada a partir de RNA de tetratirídeos por RT-PCR, clonada por recombinação in vivo em vetor modificado da série pGEX e expressa em Escherichia coli como proteína de fusão com a glutationa-Stransferase (GST). A proteína recombinante foi posteriormente purificada por cromatografia de afinidade em coluna de Glutathione Sepharose clivada com a protease TEV para liberação da GST e utilizada na imunização de um coelho. O antissoro policlonal monoespecífico assim produzido foi utilizado em experimentos de imunoblot para confirmar que o nível de expressão da McCHD é maior em tetratirídeos do que em vermes adultos. Experimentos de imunohistoquímica e de análise transcricional por RT-qPCR serão agora realizados para uma melhor caracterização do padrão de expressão espaçotemporal da McCHD ao longo do processo de desenvolvimento de M. corti.