Caracterização bioquímica, estrutural e farmacológica de um novo inibidor de proteinases do tipo Bowman-Birk isolado de Canavalia ensiformis

• Autor(a) principal: Zanon, Pamela
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/238144
• topic: Inibidor da tripsina de soja de Bowman-Birk; Tripsina; Aneurisma aórtico; Angiotensinas; Mastócitos; Inhibitor; Chymase; Trypsin; Aortic aneurysm; Angiotensin; Mast cells

Na visão clássica do sistema renina-angiotensina (RAS), a angiotensina II (Ang II) é gerada pela ação da enzima conversora de angiotensina (ACE). Evidências recentes vêm sugerindo que possam existir vias alternativas de geração de Ang II no ambiente intracelular em determinadas condições patológicas. Nesses casos a principal enzima conversora de Ang II é a quimase. Em condições de hiperglicemia, produtos avançados de glicação podem ativar quimase, desviando toda a rota de geração de Ang II, causando hipertrofia e aumento de proliferação em células musculares lisas de vasos (VSMCs). Neste trabalho descrevemos a caracterização estrutural e farmacológica de uma nova molécula capaz de bloquear a quimase e uma série de eventos mediados por Ang II in vitro e in vivo. A molécula capaz de inibir quimase foi isolada das sementes de Canavalia ensiformis, após precipitação com sulfato de amônio e métodos de cromatografia de troca aniônica e afinidade em coluna de tripsinasepharose. A estrutura do peptídeo isolado foi caracterizada por espectrometria de massas e métodos de modelagem molecular. O processo de inibição foi caracterizado com substrato sintético cromogênico para quimase e tripsina. As alterações vasculares foram estudadas in vivo em modelo de permeabilidade vascular em ratos e in vitro em cultura de células da musculatura lisa de aorta (linhagem A7r5-VSMCs). A nova molécula (denominada CETI) possui massa molecular de 8.173 dáltons, é um trímero em solução aquosa, a estrutura é rica em cisteínas, resistente às variações de temperatura e pH e apresenta duas alças inibitórias, uma capaz de inibir tripsina (IC50 21,68 nM) e outra capaz bloquear quimase (IC50 13,80 nM). É um inibidor competitivo de quimase e não-competitivo de tripsina. CETI bloqueia a geração de Ang II mediada por quimase humana e a atividade tipo-quimase de mastócitos isolados do peritônio de ratos. Também reduz a permeabilidade vascular induzida por um degranulador de mastócitos (composto 48/80) in vivo. VSMCs cultivadas em meio hiperglicêmico (glicose 25 mM) apresentam um aumento na geração intracelular de Ang II que é reduzida após o tratamento prévio com CETI. O inibidor também atenua uma série de eventos mediados por Ang II em VSMCs, tais como migração, proliferação e geração de espécies reativas de oxigênio. Neste trabalho descrevemos a caracterização inédita de uma molécula capaz de bloquear uma via não-clássica do RAS, tendo, possivelmente aplicação terapêutica promissora em desordens vasculares.