Derivação e cultura de células-tronco embrionárias em substratos quimicamente definidos

• Autor(a) principal: Ruggeri, Rafael da Rocha
• Data de Publicação: 2014
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/206525
• topic: Células-tronco embrionárias; Substratos; Hidrogéis; Medicina regenerativa; Hydrogels; Poly (vinyl alcohol); Embryonic stem-cells; Bovine

Linhagens de células tronco embrionárias para uso em terapia regenerativa devem ser criadas e mantidas sob condições restritas, excluindo o uso de suplementos indefinidos. Duas etapas fundamentais na criação de uma nova linhagem de células tronco embrionárias são a aderência ao substrato exposto e sua derivação até a formação de uma nova colônia primária. Além da possibilidade de emprego em sua espécie, o estudo com células bovinas serve como modelo para produção de células tronco embrionárias humanas, eliminando barreiras éticas e morais para pesquisas com material genético humano. Embriões bovinos foram usados para testar diferentes hidrogéis como substrato para derivação de células-tronco. O polímero sintético PVA, poli (álcool vinílico), foi utilizado para obter hidrogéis funcionalizados com a sequência tetrapeptídica RGDS (arginina-glicina-aspartato-serina) e reticulações com moléculas de acido cítrico e o acido 1,2,3,4-butano tetracarboxílico (BTCA). Os substratos foram testados para citotoxicidade celular utilizando células do cumulus (CCs). As CC’s demonstraram morfologia celular normal, sem sinais de lise ou degeneração, porém notou-se ausência de proliferação nas amostras com ausência da reticulação com o BTCA. Em um segundo experimento, massas celulares de 20 embriões bovinos foram isoladas e divididas em dois grupos. O primeiro sendo marcado pelo uso de hidrogéis contendo 10% de PVA na sua composição reticulado com BTCA e o segundo apresentando 20% de PVA na sua composição e reticulado com BTCA. Em duas repetições houve uma satisfatória taxa de adesão de 20% nos substratos e sinais de uma possível derivação no substrato contendo 20% de PVA. Esses resultados motivam a aperfeiçoar nossas formulações de hidrogéis para aumento das taxas de adesão e proliferação de células tronco embrionárias sob condições definidas e potencial uso terapêutico em medicina regenerativa.