Estratégias biotecnológicas para o reposicionamento de fármacos como alternativa terapêutica para a criptococose

• Autor(a) principal: Oliveira, Natália Kronbauer de
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRGS
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/10183/184498
• topic: Cryptococcus neoformans; Criptococose; Meningite criptocócica; Bloqueadores dos canais de calcio; Amiodarona; Fluconazol; Cryptococcus neoformans; Amiodarone; Calcium; Fluconazole; MIC; Synergy

Cryptococcus neoformans é uma das leveduras responsáveis pelo desenvolvimento da meningite criptocócica, importante infecção oportunística em imunocomprometidos, a qual corresponde à terceira complicação neurológica mais comum em portadores do vírus HIV. O tratamento padrão com anfotericina B e fluconazol é efetivo em 50% a 80% dos casos, sendo a sua toxicidade e o desenvolvimento de resistência problemas recorrentes. Assim, destaca-se a necessidade pela busca de novos alvos e fármacos para o tratamento da meningite criptocócica. A reposição de fármacos já utilizados na clínica, que demonstram atividade antifúngica, como a amiodarona e outros bloqueadores de canais de cálcio, mostram-se promissores. Considerando a importância do armazenamento intracelular de cálcio mediado por transportadores deste metal na virulência de C. neoformans, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a utilização de fármacos com mecanismo de ação baseado no bloqueio de canais de cálcio como alternativa terapêutica para a criptococose. Os valores da concentração inibitória mínima (MIC) foram determinados pelo método de microdiluição utilizando linhagens mutantes nulas para os transportadores de cálcio Pmc1 e Vcx1. As linhagens selvagem H99 e complementada pmc1::PMC1 apresentaram MIC para amiodarona de 12,5 μg/mL, enquanto que os mutantes nulos pmc1, vcx1 e pmc1vcx1 apresentaram uma maior sensibilidade, tendo MICs de 6,25 μg/mL. O sinergismo entre a amiodarona e o fluconazol foi avaliado pelo método checkerboard, no qual todas as linhagens obtiveram um índice FIC que indica sinergismo entre os fármacos. Os fármacos verapamil e diltiazem não demonstraram efeito antifúngico, não sendo possível encontrar efeito sinérgico com o fluconazol. Dois importantes fatores de virulência de C. neoformans, a formação da cápsula polissacarídica e a produção de melanina foram avaliados em meio mínimo e meio com asparagina suplementado com L-DOPA, respectivamente. Esses fatores não foram afetados pela adição de amiodarona ao meio, apenas houve um pequeno aumento na formação da cápsula polissacarídica na linhagem complementada pmc1::PMC1. Os níveis de cálcio intracelular, determinados pelo marcador Fura-2 AM, não foram afetados pela adição de amiodarona. A expressão relativa de importantes genes na via mediada por Ca2+-calcineurina foram avaliados por RT-qPCR. CRZ1 e ECA1 apresentaram expressão diminuída na presença de amiodarona na linhagem mutante pmc1. Esses dados reforçam a possibilidade de fármacos bloqueadores de canais de cálcio serem utilizados na clínica combinados com fluconazol, estimulando novas possibilidades de tratamento para a meningite criptocócica.