Análise a produção de hidrolases por bactérias associadas à esponja marinha Plakina cyanorosea do litoral de Cabo Frio (RJ)

• Autor(a) principal: Lopes, Isabelle Rodrigues
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRJ
• Texto Completo: http://hdl.handle.net/11422/17569
• topic: CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MICROBIOLOGIA; CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::IMUNOLOGIA; Esponjas marinhas; Pseudoalteromonas; Microbiota; Hidrolases; Sea sponge; Hydrolases

Os microrganismos associados às esponjas deparam-se com uma grande quantidade de matéria orgânica na água filtrada, liberando exoenzimas para conversão da mesma em nutrientes mais simples. Esses simbiontes constituem uma fonte para busca desses biocatalisadores com propriedades únicas, como halotolerância e resistência a pH e temperatura, sendo de interesse para aplicação em diversos setores industriais O estudo objetivou o rastreio da produção de hidrolases por bactérias isoladas da esponja recém-descrita para a costa brasileira Plakina cyanorosea (Porifera, Homoscleromorpha). 683 bactérias foram isoladas nos meios BHI, BHI 1:10, Marine, Marine 1:10 e Gauze I a partir de cinco espécimes de P. cyanorosea. Após reativação do estoque e cultivo em seu respectivo meio de isolamento a 25ºC por 24-96 h, 305 bactérias isoladas foram semeadas em meios sólidos para a verificação da produção das exoenzimas: agarase, amilase, celulase total, lipase, esterase e peptidase. Seguidamente a 96-120 h de incubação a 25ºC, a leitura dos resultados foi efetuada, com o cálculo do Índice Enzimático (IE), considerando um IE ≥ 2,0 característico de uma estirpe potencialmente produtora da exoenzima. A termoestabilidade e a estabilidade a acidez ou alcalinidade foi verificada em meio sólido para as potenciais estirpes agarolíticas. Os extratos brutos de agarase e celulase total foram obtidos por fermentação submersa, com a determinação da atividade pela dosagem de açúcares redutores. A coleção bacteriana se destacou quanto à produção de celulases, em que 87,8% das estirpes tiveram IE ≥ 2,0 e de agarases, em que de 22 bactérias pré-selecionadas, 19 foram capazes de gerar agarases em meio sólido, com 94,2% demonstrando IE ≥ 2,0. Das bactérias testadas, 62,6% para peptidases, 61,8% para amilases, 50,4% para esterases e 32,7% para lipases, exibiram IE ≥ 2,0, respectivamente. Um conjunto de 207 estirpes foram positivas para dois ou mais desses cinco grupos de enzimas analisados, com 73 (35,3%) exibindo atividade para duas, 65 (31,4%) para três, e 55 (26,6%) para quatro hidrolases, respectivamente, e 14 bactérias isoladas (6,7%) apresentaram resultado positivo para os cinco grupos pesquisados. Duas estirpes agarolíticas, Bacillus sp. PA2MD8 (IE = 3,7) e Pseudoalteromonas sp. PA2MD11 (IE = 3,9), e duas celulolíticas, Vibrio sp. PL1G11 (IE = 8,3) e Vibrio sp. PA3G1 (IE = 7,1), foram selecionadas como potenciais produtoras. A temperatura de 28°C e o pH 5,0 foram as condições com maiores valores de IE de agarase para Pseudoalteromonas sp. PA2MD11. Após 72 h de crescimento em meio de produção mínimo otimizado, tal estirpe exibiu atividade de 0,345 U/mL. As seis hidrolases investigadas tiveram sua produção confirmada nas bactérias isoladas de P. cyanorosea, notoriamente as polissacaridases. Com base nesses resultados preliminares, o bacterioma cultivável dessa esponja marinha se notabiliza como uma promissora fonte de enzimas com aplicações relevantes nos âmbitos biotecnológico e industrial.