Relação entre APE1 e NFE2L2 na regulação de genes ligados à resposta ao estresse oxidativo

• Autor(a) principal: Guerra, Lucas Oliveira
• Data de Publicação: 2018
• Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRN
• Texto Completo: https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/43190
• topic: Inflamação; Espécie reativa de oxigênio; LPS; APE1; NFE2L2

Organismos aeróbios enfrentam um dilema quanto aos benefícios gerados pela respiração dependente de O2 e aos danos oxidados gerados pela formação de espécies reativas de oxigênio (ERO), que oxidam biomoléculas e por isso são importantes na resposta a agentes infecciosos. No entanto, essas moléculas bioreativas geradas a partir do O2 também causam danos às células do organismo, levando a complicações principalmente no DNA, lipídeos e proteínas, por isso é imprescindível para a célula ter um mecanismo de proteção contra estes danos gerados por ERO, como enzimas responsáveis pela eliminação dos ERO e de reparo de DNA. Tendo em vista esses mecanismos, há APE1/Ref-1 como uma proteína multifuncional tendo função de reduzir fatores transcricionais, muitas vezes facilitando a ligação do mesmo com o DNA, e ainda função na via de reparo por excisão de bases (BER, do inglês: base excision repair) e NFE2L2, um regulador chave na resposta celular ao estresse oxidativo, responsável por promover a transcrição de inúmeras moléculas reguladoras da homeostase redox, como o HMOX-1. O presente estudo procurou elucidar de que maneira ambas as proteínas podem estar se relacionando intracelularmente e se há diferença nessa relação ao bloquear porções distintas de APE1/Ref-1, uma vez que em trabalhos prévios do nosso grupo foi possível observar uma interação entre ambas as proteínas por meio de co-imunopreciptação e sobreposição de genes em listas de transcriptomas obtidos a partir da utilização de inibidores das diferentes funções de APE1/Ref-1. Para isso, foi proposto um modelo de estudo baseado na cultura celular de monócitos (U937), na qual a inflamação foi estimulada adicionando lipopolissacarídeo (LPS) à cultura por tempo de 24 h. Posteriormente algumas culturas foram tratadas com um inibidor indireto da função de reparo de DNA de APE1, a metoxiamina (MTX), e um inibidor de sua função redox, ativador de fatores transcricionais, o E3330, por mais 4 h, após o tempo com LPS. Resultados de qPCR nos mostraram que houve um aumento na expressão gênica de NFE2L2 e de seu alvo downstream HMOX-1 quando a cultura celular foi submetida ao tratamento com LPS+E3330 e apenas com E3330 o que nos leva a concluir que houve uma possível regulação negativa da porção redox de APE1/Ref-1 sobre NFE2L2, e consequentemente sobre seu gene-alvo HMOX-1. Resultados preliminares de western blot foram obtidos, porém faz-se necessário a continuidade dos experimentos a fim de obter reprodutibilidade e maior confiabilidade nos resultados.