Avaliação de estratégias de produção em cultivo descontínuo da proteína quimérica multi-antigênicaTgAGS/BsT de toxoplasma gondii em escherichia coli BL21 star

• Autor(a) principal: Matias, Stephanie Caroline Bivar
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UFRN
• Texto Completo: https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/44795
• topic: Toxoplasmose; Escherichia coli recombinante; Proteína quimérica

A toxoplasmose, apesar dos avanços da ciência e tecnologia, é uma doença que requer atenção uma vez que não existe uma vacina capaz de imunizar humanos e animais contra todos os tipos isolados de Toxoplasma gondii. Assim, a utilização de proteínas quiméricas, que podem conter múltiplos antígenos, é uma alternativa bastante promissora para o processo de obtenção de uma vacina e teste de diagnóstico para toxoplasmose, devido à grande diversidade de antígenos apresentados pelo T. gondii. Nesse contexto, o presente estudo tem como foco principal avaliar estratégias de cultivo descontínuo na produção da proteína quimérica multi-antigênica TgAGS/BsT de Toxoplasma gondii. Para atingir o objetivo proposto, inicialmente foram realizados diversos cultivos exploratórios para observar o comportamento cinético de E. coli BL21 Star em cinco diferentes composições de meio (2xTY, TB suplementado com glicose, TB suplementado com glicerol, LB e M9) sem adição de IPTG (indutor). Em seguida, cultivos de E. coli B21 Star foram realizados com 1.0 mM IPTG em diferentes tempos de início da indução (0,5, 1 e 6 h) no sentido de avaliar os efeitos sobre o crescimento celular, produção da proteína de interesse, pH do cultivo e formação de ácido acético. Os resultados mostraram que dentre os meios de cultivos avaliados, 2xTY e TB suplementado com glicerol apresentaram os melhores valores de concentração celular de 3,42 ± 0,05 g/L e 5,48 ± 0,05 g/L, respectivamente. Nos ensaios induzidos por IPTG, observou-se maior expressão da proteína TgAGS/BsT com início da indução em 6 h de cultivo, com concentração máxima de proteína de interesse de 1,82 ± 0,02 g/L para o meio 2xTY e 2,49 ± 0,03 g/L para o meio TB. Além disso, a indução por IPTG mais tardia proporcionou maior estabilidade do plasmídeo pET-TgAGS, permanecendo com valores acima de 90% ao final do cultivo. A expressão da proteína TgAGS/BsT foi confirmada por eletroforese, apresentando massa molecular de aproximadamente 18,6 kDa. Portanto, o presente estudo identificou as melhores condições de composição do meio de cultivo e tempo de indução para a produção da proteína TgAGS/BsT em cultivos em incubador rotativo, com resultados que encorajam a ampliação para cultivos em biorreatores de maior capacidade.