Sequências 2A e 2A-like em vírus com genoma de RNA: ocorrências e implicações evolutivas

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Lima, Juliana Gabriela Silva de
Data de Publicação: 2021
Tipo de documento: Tese
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFRN
Texto Completo: https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/45490
Resumo: As sequências 2A/2A-like são oligopeptídeos que possuem aproximadamente 18-22 aminoácidos e podem mediar uma “clivagem” cotraducional de poliproteínas em células eucarióticas. Esses peptídeos são caracterizados por ter um motivo C-terminal de nove aminoácidos - (G/H)D(V/I)EXNPGP. Essas sequências são encontradas em muitos vírus com genomas de fita simples de RNA com polaridade positiva (ssRNA(+)) ou dupla fita de RNA (dsRNA) que infectam diversos hospedeiros que variam desde espécies de protozoários até vertebrados. Devido à sua capacidade de clivagem, as sequências 2A/2A-like têm sido utilizadas em muitos sistemas de coexpressão heterólogos. Tendo em vista a importância das sequências 2A/2Alike, o presente trabalho teve como objetivo investigar e registrar a presença dessas sequências em diferentes espécies de vírus, e avaliar a importância evolutiva dessas sequências na família Totiviridae. O primeiro capítulo deste trabalho apresenta uma revisão da ocorrência das sequências 2A/2A-like em diferentes genomas virais por meio do alinhamento destas sequências com o banco de dados do NCBI utilizando a ferramenta Blastp. A abordagem utilizada possibilitou ainda a identificação de 69 novas notificações de sequências virais que contêm 2A-likes, dentre as quais, 62 são em ssRNA(+) vírus, 6 em dsRNA vírus e em um vírus com genoma de fita simples de RNA com polaridade negativa (ssRNA(-)). Trata-se do primeiro relato de uma sequência desse tipo em um ssRNA(-) vírus. No segundo capítulo, são apresentadas as relações filogenéticas entre os vírus da família Totiviridae através de uma inferência bayesiana, a partir da qual foi possível sugerir a criação do grupo Giardiavirus expandido, que compreende os vírus anteriormente agrupados em Giardiavirus, Artivirus e oito novos vírus, os quais foram divididos entre os grupos IMNV-like e GLV-like e tiveram sua ORF1 caracterizada utilizando ferramentas de bioinformática. A partir desta caracterização foram encontradas sequências semelhantes a 2A-likes em alguns vírus do grupo GLV-like, as quais foram denominadas de pseudo 2A-likes. Para avaliar se essas sequências poderiam se tornar 2A-likes funcionais o software 2A-like ranking foi desenvolvido. As análises realizadas neste programa evidenciaram que os vírus do grupo GLVlike que infectam artrópodes tem aproximadamente 50 a 76% de chance de se tornarem 2A-likes funcionais. A presença de pseudo 2A-likes em outros vírus de dsRNA também foi verificada utilizando o banco de dados do NCBI onde foi possível encontrar 96 sequências que apresentavam pseudo 2A-likes. A familia totiviriade se apresentou como um bom modelo para o estudo da evolução das sequências 2A/2Alike, dada sua grande diversidade de espécies que infectam diferentes tipos de hospedeiros. Os resultados obtidos sugerem a existência de uma correlação entre a diversidade de hospedeiros e de estruturas dos genomas dos vírus da família Totiviridae, podendo esta ser explicada pelo surgimento de sequências 2A-like funcionais a partir de sequências ancestrais descritas aqui como pseudo 2A-like. Assim, os pseudo 2A-likes podem ser um ponto-chave na evolução viral, atuando como forma de incremento ou manutenção de complexidade do genoma.
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Tese (Doutorado em Bioquímica e Biologia Molecular) - Centro de Biociências, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal, 2021.https://repositorio.ufrn.br/handle/123456789/45490As sequências 2A/2A-like são oligopeptídeos que possuem aproximadamente 18-22 aminoácidos e podem mediar uma “clivagem” cotraducional de poliproteínas em células eucarióticas. Esses peptídeos são caracterizados por ter um motivo C-terminal de nove aminoácidos - (G/H)D(V/I)EXNPGP. Essas sequências são encontradas em muitos vírus com genomas de fita simples de RNA com polaridade positiva (ssRNA(+)) ou dupla fita de RNA (dsRNA) que infectam diversos hospedeiros que variam desde espécies de protozoários até vertebrados. Devido à sua capacidade de clivagem, as sequências 2A/2A-like têm sido utilizadas em muitos sistemas de coexpressão heterólogos. Tendo em vista a importância das sequências 2A/2Alike, o presente trabalho teve como objetivo investigar e registrar a presença dessas sequências em diferentes espécies de vírus, e avaliar a importância evolutiva dessas sequências na família Totiviridae. O primeiro capítulo deste trabalho apresenta uma revisão da ocorrência das sequências 2A/2A-like em diferentes genomas virais por meio do alinhamento destas sequências com o banco de dados do NCBI utilizando a ferramenta Blastp. A abordagem utilizada possibilitou ainda a identificação de 69 novas notificações de sequências virais que contêm 2A-likes, dentre as quais, 62 são em ssRNA(+) vírus, 6 em dsRNA vírus e em um vírus com genoma de fita simples de RNA com polaridade negativa (ssRNA(-)). Trata-se do primeiro relato de uma sequência desse tipo em um ssRNA(-) vírus. No segundo capítulo, são apresentadas as relações filogenéticas entre os vírus da família Totiviridae através de uma inferência bayesiana, a partir da qual foi possível sugerir a criação do grupo Giardiavirus expandido, que compreende os vírus anteriormente agrupados em Giardiavirus, Artivirus e oito novos vírus, os quais foram divididos entre os grupos IMNV-like e GLV-like e tiveram sua ORF1 caracterizada utilizando ferramentas de bioinformática. A partir desta caracterização foram encontradas sequências semelhantes a 2A-likes em alguns vírus do grupo GLV-like, as quais foram denominadas de pseudo 2A-likes. Para avaliar se essas sequências poderiam se tornar 2A-likes funcionais o software 2A-like ranking foi desenvolvido. As análises realizadas neste programa evidenciaram que os vírus do grupo GLVlike que infectam artrópodes tem aproximadamente 50 a 76% de chance de se tornarem 2A-likes funcionais. A presença de pseudo 2A-likes em outros vírus de dsRNA também foi verificada utilizando o banco de dados do NCBI onde foi possível encontrar 96 sequências que apresentavam pseudo 2A-likes. A familia totiviriade se apresentou como um bom modelo para o estudo da evolução das sequências 2A/2Alike, dada sua grande diversidade de espécies que infectam diferentes tipos de hospedeiros. Os resultados obtidos sugerem a existência de uma correlação entre a diversidade de hospedeiros e de estruturas dos genomas dos vírus da família Totiviridae, podendo esta ser explicada pelo surgimento de sequências 2A-like funcionais a partir de sequências ancestrais descritas aqui como pseudo 2A-like. Assim, os pseudo 2A-likes podem ser um ponto-chave na evolução viral, atuando como forma de incremento ou manutenção de complexidade do genoma.2A/2A-like sequences are oligopeptides that have approximately 18-22 amino acids and can mediate a co-translational "cleavage" of polyproteins in eukaryotic cells. These peptides are characterized by having a C-terminal motif of nine amino acids -(G/H)D(V/I)EXNPGP. These sequences are found in many viruses with positive single stranded and duble stranded RNA genomes that infect a variety of hosts ranging from protozoan to vertebrate species. Due to their cleavage capacity, 2A/2A-like sequences have been used in many heterologous co-expression systems. In view of the importance of 2A/2A-like sequences, the present work aimed to investigate and record the presence of these sequences in different virus species, and to assess the evolutionary importance of these sequences in the Totiviridae family. The first chapter of this work presents a review of 2A/2A-like sequences occurrence in different viral genomes through the alignment of these sequences with the NCBI database using the Blastp tool. This approach also enabled the identification of 69 new reports of viral sequences that contain 2A-likes, among which, 62 are ssRNA(+) viruses, 6 dsRNA viruses and one virus with a negative-sense single-stranded RNA genome (ssRNA(-)). This is the first report of this type of sequence in a ssRNA(-) virus. In the second chapter, the phylogenetic relationships among the Totiviridae family viruses are presented through a bayesian inference, from which it was possible to suggest the creation of the expanded Giardiavirus group, which comprises the viruses previously grouped in Giardiavirus, Artivirus and eight new viruses, which were divided into IMNV-like and GLV-like groups and had their ORF1 characterized using bioinformatics tools. During this characterization, sequences similar to 2Alikes were found in some viruses of the GLV-like group, which were called pseudo 2A-likes. To assess whether these sequences could become functional 2A-likes, the 2A-like ranking software was developed in this study. The analyses carried out in this program showed that viruses from the GLV-like group that infect arthropods have approximately 50 to 76% chance of becoming functional 2Alikes. The presence of pseudo 2A-likes in other dsRNA viruses was also verified using the NCBI database where it was possible to find 96 sequences that presented pseudo 2A-likes. The results presented in this study reinforce the diversity of hosts and genome structure of the Totiviridae family viruses, which can be explained by the emergence of functional 2A-like sequences from ancestral sequences described here as pseudo 2A-like. Thus, pseudo 2A-likes can be a key point in viral evolution, acting as a way to increase or maintain the complexity of the genome.Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPESConselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPqUniversidade Federal do Rio Grande do NortePROGRAMA DE PÓS-GRADUAÇÃO EM BIOQUÍMICAUFRNBrasilFamília TotiviridaePseudo 2A-like2A-like rankingSequências 2A/2A-likeIMNV-likeGLV-likeSequências 2A e 2A-like em vírus com genoma de RNA: ocorrências e implicações evolutivasinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFRNinstname:Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)instacron:UFRNORIGINALSequencias2A2Alike_Lima_2021.pdfapplication/pdf3872527https://repositorio.ufrn.br/bitstream/123456789/45490/1/Sequencias2A2Alike_Lima_2021.pdfc0b28aa1dd1eb5c481d9b7c2d98681d3MD51123456789/454902022-05-02 12:08:17.518oai:https://repositorio.ufrn.br:123456789/45490Repositório de PublicaçõesPUBhttp://repositorio.ufrn.br/oai/opendoar:2022-05-02T15:08:17Repositório Institucional da UFRN - Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN)false
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