Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE)
Autor(a) principal: | |
---|---|
Data de Publicação: | 2007 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJ |
Texto Completo: | https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9635 |
Resumo: | Neste trabalho foram realizados ensaios de atividade de proteinase em solução e com proteínas imobilizadas em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio copolimerizado com gelatina, para detecção e quantificação das proteinases presentes nos extratos larvares de segundo (L2) e terceiro (L3) estágios de Dermatobia hominis. Nos ensaios quantitativos, utilizou-se um painel de peptídeos sintéticos específicos para as principais classes de proteinases. Verificamos que o substrato pGlu-Phe-Leu p-nitroanilide foi hidrolisado pelo extrato total de L2 (3,0 ± 0,2 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e L3 (7,7 ± 0,1 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e que ambas atividades foram parcialmente inibidas pelo trans-epoxysuccinyl-L-leucylamido-(4-guanidino)butane, 15 % e 3 % respectivamente. Também, demonstramos que o substrato Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester foi hidrolisado pelos extratos totais de L2 (117 ± 24 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e L3 (111 ± 10 nmoles hora-1 mg de proteina-1), sugerindo uma predominância da atividade esterásica nestes extratos. A atividade específica de serino-proteinases foi totalmente inibida pelo phenylmethylsulphonyl fluoride nos extratos de L3, enquanto que somente 10 % desta atividade foi inibida nos extrados de L2. Além disso, nós detectamos que o extrato total das larvas L2 (Km = 7,59) tem maior afinidade ao Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester do que o extrato total das larva de L3 (Km = 35,75). Os resultados do ensaio qualitativo com géis de substrato sugerem que os extratos larvares L2 e L3 expressam serino-proteinases com similares (13 kDa e 22 kDa) e distintas (50 kDa em L2 e 30 kDa em L3) massas moleculares relativas. Adicionalmente, isolamos uma atividade esterásica enriquecida do extrato total de L3 utilizando sucessivas cromatografias em colunas de Aprotinina-Agarose e DEAE-Sephacell. Com esta estratégia, detectamos somente uma banda de proteinase de 50 kDa neste extrato total. Estes resultados contribuem para a caracterização das proteinases larvares de D. hominis. |
id |
UFRRJ-1_7df29c61a7a5c3b280279631db0ad4ae |
---|---|
oai_identifier_str |
oai:rima.ufrrj.br:20.500.14407/9635 |
network_acronym_str |
UFRRJ-1 |
network_name_str |
Repositório Institucional da UFRRJ |
repository_id_str |
|
spelling |
Pires, Fabiano AraujoMoya Borja, Gonzalo Efrain325.235.057-20http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727683Z4Alves, Carlos Roberto698.984.487-68http://lattes.cnpq.br/9011901357649135Barreira, Jairo Dias517.209.737-68http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786414Z2010.476.297-71http://lattes.cnpq.br/39686535413756542023-12-21T18:42:07Z2023-12-21T18:42:07Z2007-04-26PIRES, Fabiano Araujo. Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (Diptera: Cuterebridae). 2007. 81 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias) - Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica - RJ, 2007.https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9635Neste trabalho foram realizados ensaios de atividade de proteinase em solução e com proteínas imobilizadas em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio copolimerizado com gelatina, para detecção e quantificação das proteinases presentes nos extratos larvares de segundo (L2) e terceiro (L3) estágios de Dermatobia hominis. Nos ensaios quantitativos, utilizou-se um painel de peptídeos sintéticos específicos para as principais classes de proteinases. Verificamos que o substrato pGlu-Phe-Leu p-nitroanilide foi hidrolisado pelo extrato total de L2 (3,0 ± 0,2 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e L3 (7,7 ± 0,1 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e que ambas atividades foram parcialmente inibidas pelo trans-epoxysuccinyl-L-leucylamido-(4-guanidino)butane, 15 % e 3 % respectivamente. Também, demonstramos que o substrato Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester foi hidrolisado pelos extratos totais de L2 (117 ± 24 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e L3 (111 ± 10 nmoles hora-1 mg de proteina-1), sugerindo uma predominância da atividade esterásica nestes extratos. A atividade específica de serino-proteinases foi totalmente inibida pelo phenylmethylsulphonyl fluoride nos extratos de L3, enquanto que somente 10 % desta atividade foi inibida nos extrados de L2. Além disso, nós detectamos que o extrato total das larvas L2 (Km = 7,59) tem maior afinidade ao Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester do que o extrato total das larva de L3 (Km = 35,75). Os resultados do ensaio qualitativo com géis de substrato sugerem que os extratos larvares L2 e L3 expressam serino-proteinases com similares (13 kDa e 22 kDa) e distintas (50 kDa em L2 e 30 kDa em L3) massas moleculares relativas. Adicionalmente, isolamos uma atividade esterásica enriquecida do extrato total de L3 utilizando sucessivas cromatografias em colunas de Aprotinina-Agarose e DEAE-Sephacell. Com esta estratégia, detectamos somente uma banda de proteinase de 50 kDa neste extrato total. Estes resultados contribuem para a caracterização das proteinases larvares de D. hominis.CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e TecnológicoWe performed a combination of proteinase assay, either in solution or immobilized in sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel copolymerized with gelatin, to detect and quantify proteinases of Dermatobia hominis second (L2) and third (L3) instar larvae. In quantitative assays, we examined proteinase activity by hydrolysis of a panel of peptide bonds specific for the main proteinase classes. We verified that the pGlu-Phe-Leu p-nitroanilide substrate was hydrolyzed by crude extracts of L2 (3.0 ± 0.2 nmoles hour-1 mg of protein-1) and L3 (7.7 ± 0.1 nmoles hour-1 mg of protein-1) and that both activities were partially inhibited by transepoxysuccinyl- L-leucylamido-(4-guanidino)butane, 15 % and 3 % respectively. Also, we demonstrated that the Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester substrate was hydrolyzed by crude extracts of L2 (117 ± 24 nmoles hour-1 mg of protein-1) and L3 (111 ± 10 nmoles hour-1 mg of protein-1), suggesting a predominance of esterase activity in the crude larval preparation. Interestingly, the specific activity of serine-proteinases was totally inhibited by Phenylmethylsulphonyl fluoride in the L3 crude extract, while only 10 % of this enzyme class activity was inhibited in the L2 crude extract. Also, we have detected crude extract L2 (Km = 7,59) larvae have more affinity than L3 larvae (Km = 35,75) to Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester. The results of the qualitative assays with substrate gels suggested that L2 and L3 larvae express serine-proteinases with similar (13 kDa and 22 kDa) and distinct (50 kDa in L2 and 30 kDa in L3) relative molecular masses. Additionally, we have isolated an enriched esterase activity from L3 crude extract using successive chromatographies in Aprotinine-Agarose and DEAE-Sephacell columns. By this strategy we detected only one 50 kDa proteinase in this larvae crude extract. Finally, these findings contribute to the biochemical characterization of D. hominis L2 and L3 larvae.application/pdfporUniversidade Federal Rural do Rio de JaneiroPrograma de Pós-Graduação em Ciências VeterináriasUFRRJBrasilInstituto de VeterináriaDermatobia hominisProteinasesSerino-proteinasesMedicina VeterináriaProteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE)Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) larvae proteinasesinfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesishttps://tede.ufrrj.br/retrieve/59930/2007%20-%20Fabiano%20Araujo%20Pires.pdf.jpghttps://tede.ufrrj.br/jspui/handle/tede/815Made available in DSpace on 2016-04-28T20:16:24Z (GMT). No. of bitstreams: 1 2007 - Fabiano Araujo Pires.pdf: 878766 bytes, checksum: 9179bfb28ddd6cee14d8d4414534b8f8 (MD5) Previous issue date: 2007-04-26info:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJinstname:Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ)instacron:UFRRJORIGINAL2007 - Fabiano Araujo Pires.pdfapplication/pdf6436788https://rima.ufrrj.br/jspui/bitstream/20.500.14407/9635/1/2007%20-%20Fabiano%20Araujo%20Pires.pdfbf02a39c71f40e5038bfb38b32bfc12cMD51THUMBNAIL2007 - Fabiano Araujo Pires.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1943https://rima.ufrrj.br/jspui/bitstream/20.500.14407/9635/2/2007%20-%20Fabiano%20Araujo%20Pires.pdf.jpg8c1280dca4077478b5fad29883580c72MD52TEXT2007 - Fabiano Araujo Pires.pdf.txtExtracted Texttext/plain39564https://rima.ufrrj.br/jspui/bitstream/20.500.14407/9635/3/2007%20-%20Fabiano%20Araujo%20Pires.pdf.txtbd7dc9bf4d65d63f13b4f513c73f3957MD5320.500.14407/96352023-12-21 15:42:07.206oai:rima.ufrrj.br:20.500.14407/9635Biblioteca Digital de Teses e Dissertaçõeshttps://tede.ufrrj.br/PUBhttps://tede.ufrrj.br/oai/requestbibliot@ufrrj.br||bibliot@ufrrj.bropendoar:2023-12-21T18:42:07Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJ - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ)false |
dc.title.por.fl_str_mv |
Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) |
dc.title.alternative.eng.fl_str_mv |
Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) larvae proteinases |
title |
Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) |
spellingShingle |
Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) Pires, Fabiano Araujo Dermatobia hominis Proteinases Serino-proteinases Medicina Veterinária |
title_short |
Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) |
title_full |
Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) |
title_fullStr |
Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) |
title_full_unstemmed |
Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) |
title_sort |
Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (DIPTERA: CUTEREBRIDAE) |
author |
Pires, Fabiano Araujo |
author_facet |
Pires, Fabiano Araujo |
author_role |
author |
dc.contributor.author.fl_str_mv |
Pires, Fabiano Araujo |
dc.contributor.advisor1.fl_str_mv |
Moya Borja, Gonzalo Efrain |
dc.contributor.advisor1ID.fl_str_mv |
325.235.057-20 |
dc.contributor.advisor1Lattes.fl_str_mv |
http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4727683Z4 |
dc.contributor.advisor-co1.fl_str_mv |
Alves, Carlos Roberto |
dc.contributor.advisor-co1ID.fl_str_mv |
698.984.487-68 |
dc.contributor.advisor-co1Lattes.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/9011901357649135 |
dc.contributor.advisor-co2.fl_str_mv |
Barreira, Jairo Dias |
dc.contributor.advisor-co2ID.fl_str_mv |
517.209.737-68 |
dc.contributor.advisor-co2Lattes.fl_str_mv |
http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4786414Z2 |
dc.contributor.authorID.fl_str_mv |
010.476.297-71 |
dc.contributor.authorLattes.fl_str_mv |
http://lattes.cnpq.br/3968653541375654 |
contributor_str_mv |
Moya Borja, Gonzalo Efrain Alves, Carlos Roberto Barreira, Jairo Dias |
dc.subject.por.fl_str_mv |
Dermatobia hominis Proteinases Serino-proteinases |
topic |
Dermatobia hominis Proteinases Serino-proteinases Medicina Veterinária |
dc.subject.cnpq.fl_str_mv |
Medicina Veterinária |
description |
Neste trabalho foram realizados ensaios de atividade de proteinase em solução e com proteínas imobilizadas em gel de poliacrilamida contendo dodecil sulfato de sódio copolimerizado com gelatina, para detecção e quantificação das proteinases presentes nos extratos larvares de segundo (L2) e terceiro (L3) estágios de Dermatobia hominis. Nos ensaios quantitativos, utilizou-se um painel de peptídeos sintéticos específicos para as principais classes de proteinases. Verificamos que o substrato pGlu-Phe-Leu p-nitroanilide foi hidrolisado pelo extrato total de L2 (3,0 ± 0,2 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e L3 (7,7 ± 0,1 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e que ambas atividades foram parcialmente inibidas pelo trans-epoxysuccinyl-L-leucylamido-(4-guanidino)butane, 15 % e 3 % respectivamente. Também, demonstramos que o substrato Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester foi hidrolisado pelos extratos totais de L2 (117 ± 24 nmoles hora-1 mg de proteína-1) e L3 (111 ± 10 nmoles hora-1 mg de proteina-1), sugerindo uma predominância da atividade esterásica nestes extratos. A atividade específica de serino-proteinases foi totalmente inibida pelo phenylmethylsulphonyl fluoride nos extratos de L3, enquanto que somente 10 % desta atividade foi inibida nos extrados de L2. Além disso, nós detectamos que o extrato total das larvas L2 (Km = 7,59) tem maior afinidade ao Na-p-Tosyl-L-Arg methyl ester do que o extrato total das larva de L3 (Km = 35,75). Os resultados do ensaio qualitativo com géis de substrato sugerem que os extratos larvares L2 e L3 expressam serino-proteinases com similares (13 kDa e 22 kDa) e distintas (50 kDa em L2 e 30 kDa em L3) massas moleculares relativas. Adicionalmente, isolamos uma atividade esterásica enriquecida do extrato total de L3 utilizando sucessivas cromatografias em colunas de Aprotinina-Agarose e DEAE-Sephacell. Com esta estratégia, detectamos somente uma banda de proteinase de 50 kDa neste extrato total. Estes resultados contribuem para a caracterização das proteinases larvares de D. hominis. |
publishDate |
2007 |
dc.date.issued.fl_str_mv |
2007-04-26 |
dc.date.accessioned.fl_str_mv |
2023-12-21T18:42:07Z |
dc.date.available.fl_str_mv |
2023-12-21T18:42:07Z |
dc.type.status.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/publishedVersion |
dc.type.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/doctoralThesis |
format |
doctoralThesis |
status_str |
publishedVersion |
dc.identifier.citation.fl_str_mv |
PIRES, Fabiano Araujo. Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (Diptera: Cuterebridae). 2007. 81 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias) - Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica - RJ, 2007. |
dc.identifier.uri.fl_str_mv |
https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9635 |
identifier_str_mv |
PIRES, Fabiano Araujo. Proteinases larvares de Dermatobia hominis (Linnaeus Jr., 1781) (Diptera: Cuterebridae). 2007. 81 f. Tese (Doutorado em Ciências Veterinárias) - Instituto de Veterinária, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Seropédica - RJ, 2007. |
url |
https://rima.ufrrj.br/jspui/handle/20.500.14407/9635 |
dc.language.iso.fl_str_mv |
por |
language |
por |
dc.rights.driver.fl_str_mv |
info:eu-repo/semantics/openAccess |
eu_rights_str_mv |
openAccess |
dc.format.none.fl_str_mv |
application/pdf |
dc.publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro |
dc.publisher.program.fl_str_mv |
Programa de Pós-Graduação em Ciências Veterinárias |
dc.publisher.initials.fl_str_mv |
UFRRJ |
dc.publisher.country.fl_str_mv |
Brasil |
dc.publisher.department.fl_str_mv |
Instituto de Veterinária |
publisher.none.fl_str_mv |
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro |
dc.source.none.fl_str_mv |
reponame:Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJ instname:Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ) instacron:UFRRJ |
instname_str |
Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ) |
instacron_str |
UFRRJ |
institution |
UFRRJ |
reponame_str |
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJ |
collection |
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJ |
bitstream.url.fl_str_mv |
https://rima.ufrrj.br/jspui/bitstream/20.500.14407/9635/1/2007%20-%20Fabiano%20Araujo%20Pires.pdf https://rima.ufrrj.br/jspui/bitstream/20.500.14407/9635/2/2007%20-%20Fabiano%20Araujo%20Pires.pdf.jpg https://rima.ufrrj.br/jspui/bitstream/20.500.14407/9635/3/2007%20-%20Fabiano%20Araujo%20Pires.pdf.txt |
bitstream.checksum.fl_str_mv |
bf02a39c71f40e5038bfb38b32bfc12c 8c1280dca4077478b5fad29883580c72 bd7dc9bf4d65d63f13b4f513c73f3957 |
bitstream.checksumAlgorithm.fl_str_mv |
MD5 MD5 MD5 |
repository.name.fl_str_mv |
Biblioteca Digital de Teses e Dissertações da UFRRJ - Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro (UFRRJ) |
repository.mail.fl_str_mv |
bibliot@ufrrj.br||bibliot@ufrrj.br |
_version_ |
1810108009111617536 |