Validação de método bioanalítico para a quantificação de metabólitos séricos da dipirona por cromatografia líquida de alta eficiência

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Marques, Bruna Soares
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFSC
Texto Completo: https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/238072
Resumo: TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências da Saúde. Farmácia.
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spelling Validação de método bioanalítico para a quantificação de metabólitos séricos da dipirona por cromatografia líquida de alta eficiênciaDipironaMetabólitosValidação bioanalíticaCLAEInterferência analíticaTCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências da Saúde. Farmácia.Introdução - No Brasil, a dipirona é um dos medicamentos mais usados para o alívio da dor e da febre, devido ao fácil acesso e baixo custo. A dipirona é considerada um pró-fármaco, visto que logo após a sua ingestão ela é hidrolisada no trato gastrointestinal e dá origem a diferentes metabólitos ativos, sendo os principais a 4-metil-amino-antipirina (4-MAA), a 4-amino-antipirina (4-AA), a 4-acetil-amino-antipirina (4-AAA) e a 4-formil-amino-antipirina (4-FAA). Além dos efeitos farmacológicos esperados, os metabólitos da dipirona também interferem em vários ensaios analíticos de parâmetros bioquímicos séricos in vitro. Para apoiar o estudo de interferência dos metabólitos da dipirona em exames laboratoriais de nosso grupo, é necessário um método bioanalítico capaz de medir os metabólitos no soro e, assim, estabelecer eventuais associações entre a interferência in vitro e a concentração dos metabólitos encontrada in vivo, após a ingestão de dipirona. Objetivos - Validar um método descrito na literatura, com algumas modificações, para a identificação e quantificação dos metabólitos da dipirona em soro humano por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE). Métodos - Amostras de soro adicionadas dos metabólitos foram extraídas com clorofórmio e hidróxido de sódio. As condições de análise foram: coluna C18 (250 x 4,6 mm; 5 μm) ODS-Tosoh (Japão); fase móvel acetato de sódio 50 mM (pH = 6,2): acetonitrila (86:14 v/v) em modo isocrático; fluxo de 1,25 mL/min; e detecção em 257 nm. Os parâmetros de validação avaliados foram seletividade, linearidade, efeito matriz, precisão, exatidão, limites de detecção e de quantificação e estabilidade. Resultados - O método escolhido se mostrou seletivo e com linearidade adequada (r > 0,99) para todos os metabólitos. Os limites de detecção (LD) e de quantificação (LQ) atenderam às necessidades, de acordo com as concentrações encontradas após a ingestão de 1 g de dipirona na literatura científica, exceto para o metabólito 4-AA. A matriz soro não interferiu na quantificação dos metabólitos 4-AAA e 4 FAA, entretanto, para os metabólitos 4-AA e 4-MAA houve efeito matriz. O método foi exato para todos os metabólitos. Todavia, precisão adequada foi encontrada apenas para os metabólitos 4-AAA e 4-FAA. Para a quantificação dos metabólitos 4-AA e 4-MAA no soro, deverá ser usado o método de padrão interno. As amostras de soro não se mostraram estáveis para análise em dias subsequentes à coleta de sangue, sendo necessária, assim, a sua imediata quantificação. Conclusão - O método bioanalítico se mostrou válido para quantificar os metabólitos da dipirona em soro humano. No entanto, alguns ajustes são necessários para um melhor desempenho, particularmente em relação à imprecisão e estabilidade.Introduction - In Brazil, dipyrone is one of the most used drugs for pain and fever, due to its easy access and low cost. Dipyrone is considered a prodrug, since after its ingestion it is hydrolyzed in the gastrointestinal tract and gives rise to different plasma active metabolites. The most important are 4-methyl-amino-antipyrine (4-MAA), 4-amino-antipyrine (4-AA), 4-acetyl-amino-antipyrine (4-AAA) and 4-formyl-amino-antipyrine (4-FAA). In addition to the expected pharmacological effects, dipyrone metabolites also interfere in various analytical assays of in vitro serum biochemical parameters. To support the investigation of the interference of dipyrone metabolites in laboratory tests performed by our group, a bioanalytical method capable of measuring metabolites in serum is needed to establish eventual associations between in vitro interferences and in vivo serum metabolites concentration after dipyrone intake. Objective - To validate a published method for identifying and quantifying metabolites in human serum by high performance liquid chromatography (HPLC). Methods - Serum samples spiked with metabolites were extracted with chloroform and sodium hydroxide. The analysis conditions were: column C18 (250 x 4.6 mm; 5 μm) ODS-Tosoh (Japan); mobile phase 50 mM sodium acetate (pH = 6.2): acetonitrile (86:14 v/v) in isocratic mode; flow rate of 1.25 mL/min; and detection at 257 nm. The validation parameters herein evaluated were selectivity, linearity, matrix effect, precision and accuracy, limits of detection and quantification, and stability. Results - The chosen method proved to be selective and with adequate linearity (r > 0.99) for all metabolites. Limits of detection (LD) and quantification (LQ) were coherent to published concentrations found after ingestion of 1g dipyrone, except for the metabolite 4-AA. The serum matrix did not interfere in the quantification of 4-AAA and 4-FAA metabolites, however, for 4-AA and 4-MAA metabolites there was effect of serum matrix. Accuracy was found for all metabolites. However, only quantification of 4-AAA and 4-FAA metabolites was precise, for the quantification of 4-AAA and 4-FAA metabolites in serum, the internal standard method must be used. Serum samples were not stable for analysis in the days following blood collection, requiring, therefore, immediate measurement of metabolites. Conclusion - The bioanalytical method was validated to quantify dipyrone metabolites in human serum; however, some modifications are necessary for a better performance, particularly regarding imprecision and stability.Florianópolis, SCSilva, Edson Luiz daMartinello, FláviaUniversidade Federal de Santa CatarinaMarques, Bruna Soares2022-08-08T23:50:45Z2022-08-08T23:50:45Z2022-08-04info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesis56 f.application/pdfapplication/pdfhttps://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/238072info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSC2022-08-08T23:50:45Zoai:repositorio.ufsc.br:123456789/238072Repositório InstitucionalPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestopendoar:23732022-08-08T23:50:45Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false
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