Padronização de ensaio in vitro para triagem de compostos com potencial atividade imunomodulatória sobre linfócitos B

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Silveira, Douglas Bardini
Data de Publicação: 2011
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFSC
Texto Completo: http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/95193
Resumo: Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2011
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spelling Universidade Federal de Santa CatarinaSilveira, Douglas BardiniZanetti, Carlos Roberto2012-10-25T21:58:37Z2012-10-25T21:58:37Z20112011287559http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/95193Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, Florianópolis, 2011O presente trabalho propôs desenvolver uma metodologia in vitro simples, sensível e reprodutível para a prospecção de compostos obtidos de produtos naturais ou seus derivados sintéticos com potencial atividade imunomodulatória sobre linfócitos B, principal célula efetora da resposta imune humoral, como alternativa ao uso de sistemas experimentais in vivo. O planejamento do estudo fundamentou-se na utilização da linhagem linfoblastóide B humana SKW 6.4, imortalizada via EBV, como modelo preditivo in vitro; na padronização do método ELISA para a titulação de imunoglobulinas totais secretadas em cultura, empregada como parâmetro inicial de avaliação; e na definição de condições experimentais e padrões comparativos que propiciem a análise do modelo selecionado quanto à modulação de suas funções imunes. O protocolo de cultivo celular e demais variáveis foram determinados para placas de cultura de 96 micropoços. Células SKW 6.4 foram fortemente imunoestimuladas em tratamento com PMA ou LPS nas concentrações ótimas de 100ng·mL-1 ou 100µg·mL-1, respectivamente. Condições referenciais de imunossupressão foram estabelecidas após ensaio com 25µg·mL-1 de AZA, 50ng·mL-1 de MPA ou 10ng·mL-1 de RAPA. A secreção de IL-6 pelo modelo in vitro foi claramente modulada na presença de LPS e DEX, possibilitando sua dosagem como parâmetro avaliativo adicional de resposta imunológica. A análise de diferentes extratos polissacarídicos de Agaricus subrufescens conforme o ensaio padronizado revelou significativa atividade imunoestimulatória sobre células SKW 6.4 para frações com maior peso molecular médio (~630kDa), permitindo especular sobre possíveis rotas de ativação e sugerir um método ótimo de purificação para futura aplicação biotecnológica. Os resultados globais alcançados neste estudo demonstraram a sensibilidade e eficácia do ensaio in vitro desenvolvido, viabilizando sua utilização na pesquisa e triagem de compostos com potencial atividade imunomodulatória sobre linfócitos B como possível método substitutivo ao uso de animais de experimentação.72 p.| il., grafs.porFlorianópolis, SCBiotecnologiaLinfócitos BImunomodulaçãoPolissacarideosPadronização de ensaio in vitro para triagem de compostos com potencial atividade imunomodulatória sobre linfócitos Binfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesisreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSCinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINAL287559.pdfapplication/pdf517631https://repositorio.ufsc.br/bitstream/123456789/95193/1/287559.pdfec350fa2e545cb38f933d0b6feb4f38bMD51TEXT287559.pdf.txt287559.pdf.txtExtracted Texttext/plain133878https://repositorio.ufsc.br/bitstream/123456789/95193/2/287559.pdf.txt3b020b4aa4fc6400c96904161bfc4f5eMD52THUMBNAIL287559.pdf.jpg287559.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1296https://repositorio.ufsc.br/bitstream/123456789/95193/3/287559.pdf.jpg3b8143300a90f5f18441caf1c1d5c375MD53123456789/951932013-04-30 11:21:39.334oai:repositorio.ufsc.br:123456789/95193Repositório de PublicaçõesPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestopendoar:23732013-04-30T14:21:39Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false
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