Expressão, purificação e caracterização bioquímica de lipase recombinante de Staphylococcus xylosus e esterase recombinante de Lactobacillus plantarum
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Data de Publicação: | 2012 |
Tipo de documento: | Tese |
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Texto Completo: | http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/94144 |
Resumo: | Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2010 |
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Universidade Federal de Santa CatarinaBrod, Fábio Cristiano AngonesiArisi, Ana Carolina Maisonnave2012-10-25T07:00:59Z2012-10-25T07:00:59Z2012-10-25T07:00:59Z281745http://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/94144Tese (doutorado) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Agrárias, Programa de Pós-graduação em Ciência dos Alimentos, Florianópolis, 2010Esterases e lipases pertencem ao grupo das hidrolases e são enzimas que catalisam a clivagem e a síntese de ligações éster, sendo um grupo de enzimas biotecnologicamente relevantes com inúmeras aplicações em indústrias de alimentos, laticínios, detergentes e farmacêuticas. O objetivo deste trabalho foi clonar, expressar em Escherichia coli, purificar e caracterizar bioquimicamente uma lipase recombinante de Staphylococcus xylosus e uma esterase recombinante de Lactobacillus plantarum. O gene da lipase (1084 pb) foi amplificado de uma cepa de S. xylosus isolada de salame fermentado naturalmente e introduzido no vetor de expressão pET14b para expressar a proteína fusão recombinante (lipase contendo a cauda de His6). A lipase recombinante de S. xylosus foi purificada por cromatografia de afinidade em um sistema HPLC. A lipase recombinante é um monômero em solução, como determinado pela cromatografia de exclusão molecular. Ela apresentou alta atividade em pH 9,0 e 42°C para acetato de p-nitrofenila e butirato de p-nitrofenila entre vários ésteres testados (pNPC2, pNPC4, pNPC10, pNPC12, pNPC14, pNPC16, pNPC18). Além disso, apresentou uma interessante estabilidade térmica após incubação por 10 min a 95°C, mantendo 77 % de sua atividade inicial. O gene da esterase de Lactobacillus plantarum (1014 pb) foi amplificado e clonado no vetor de expressão pET14b para expressar em Escherichia coli a proteína contendo a cauda His6. A esterase recombinante de Lactobacillus plantarum foi purificada em resina Ni-NTA e apresentou uma massa molecular aparente de aproximadamente 38 kDa. A enzima apresentou a atividade enzimática mais elevada em pH 6,0 e 40°C e preferência pelo butirato de p-nitrofenila, embora tenha hidrolisado mais eficientemente o acetato de p-nitrofenila. Além disso, este estudo apresenta, pela primeira vez, dados de dicroísmo circular sobre a estrutura secundária de uma esterase de Lactobacillus plantarum.111 p.| il., grafs., tabs.porTecnologia de alimentosCiência dos alimentosLipaseStaphylococcus xylosusEsterasesLactobacillus plantarumExpressão, purificação e caracterização bioquímica de lipase recombinante de Staphylococcus xylosus e esterase recombinante de Lactobacillus plantaruminfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSCinfo:eu-repo/semantics/openAccessORIGINAL281745.pdfapplication/pdf3514340https://repositorio.ufsc.br/bitstream/123456789/94144/1/281745.pdff888864f9bbaf44bdf369ae8dec134e3MD51TEXT281745.pdf.txt281745.pdf.txtExtracted Texttext/plain154177https://repositorio.ufsc.br/bitstream/123456789/94144/2/281745.pdf.txtea49375f7c8c4ab4a244038abac87871MD52THUMBNAIL281745.pdf.jpg281745.pdf.jpgGenerated Thumbnailimage/jpeg1264https://repositorio.ufsc.br/bitstream/123456789/94144/3/281745.pdf.jpg448e8c0136c08c2eb82c563acfec3ba3MD53123456789/941442013-05-03 06:56:55.299oai:repositorio.ufsc.br:123456789/94144Repositório de PublicaçõesPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestopendoar:23732013-05-03T09:56:55Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false |
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