Expressão heteróloga de uma proteína quimérica pan-tripanosomatídeos em Leishmania tarentolae e Trypanosoma rangeli

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Bastiani, Ana Paula da Silva
Data de Publicação: 2022
Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFSC
Texto Completo: https://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/243593
Resumo: TCC (graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Ciências Biológicas.
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spelling Expressão heteróloga de uma proteína quimérica pan-tripanosomatídeos em Leishmania tarentolae e Trypanosoma rangeliVacinaDoenças negligenciadasTripanosomatídeosTCC (graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina, Centro de Ciências Biológicas, Ciências Biológicas.A doença de Chagas causada pelo protozoário Trypanosoma cruzi e as leishmanioses causadas por diferentes espécies do gênero Leishmania e acometem em conjunto cerca de 7-8 milhões de pessoas no mundo. A prevenção e o controle dessas doenças ainda são baseados primariamente no controle vetorial, sendo que os medicamentos disponíveis apresentam elevada toxicidade e baixa eficácia. Buscamos desenvolver neste estudo uma estratégia vacinal baseada no uso de tripanosomatídeos não patogênicos (L. tarentolae e T. rangeli) expressando uma proteína quimérica formada por genes que codificam epítopos imunogênicos conservados presentes em diferentes tripanosomatídeos patogênicos. Testes preliminares em camundongos imunizados com a proteína purificada revelaram uma redução da parasitemia pelo T. cruzi e uma redução das lesões e cargas parasitárias nos animais infectados com L. amazonensis, L. mexicana e L. infantum. No presente estudo, transfectamos promastigotas de L. tarentolae e epimastigotas de T. rangeli com o plasmídeo FlagGPI_pROCK Neo contendo o gene da quimera proteica. Ainda durante a seleção dos transfectantes com geneticin (G-418), a presença do plasmídeo verificada através de PCR e a expressão da proteína quimérica foi avaliada indiretamente pela detecção da expressão de mNeonGreen. Para L. tarentolae, após sete semanas de seleção, os parasitos apresentaram motilidade e morfologia alteradas (formas arredondadas) e um padrão de fluorescência puntiforme, não progredindo em cultura. A população de T. rangeli transfectada ainda em processo inicial de seleção, apresenta expressão puntiforme de mNeonGreen 48h após a transfecção. Com as primeiras passagens, observamos parasitos com morfologia, motilidade e padrões de divisão compatíveis com os parasitos selvagens, possuindo uma fluorescência em crescente intensidade. Os parasitos-controle transfectados com o plasmídeo base (FlagGPI_pROCK Neo), além de apresentarem os parâmetros biológicos semelhantes aos parasitos selvagens, apresentam uma fluorescência dispersa no citoplasma. Ensaios de Western blot utilizando um antissoro anti-quimera serão realizados com estas populações visando confirmar a expressão da quimera proteica.Florianópolis, SC.Grisard, Edmundo CarlosUniversidade Federal de Santa Catarina.Bastiani, Ana Paula da Silva2022-12-26T15:08:22Z2022-12-26T15:08:22Z2022-12-05info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesisapplication/pdfhttps://repositorio.ufsc.br/handle/123456789/243593Open Access.info:eu-repo/semantics/openAccessporreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSC2022-12-26T15:08:22Zoai:repositorio.ufsc.br:123456789/243593Repositório InstitucionalPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestopendoar:23732022-12-26T15:08:22Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false
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