Transfecção integrativa do gene da B-galactosidase em três espécies de leishmania e padronização de ensaio colorimétrico para triagem de compostos leishmanicida utilizando leishmania (V.) braziliensis

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Costa, Danielle Tocantis Moura
Data de Publicação: 2015
Tipo de documento: Dissertação
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFSC
Texto Completo: https://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/160790
Resumo: Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2015
id UFSC_bbe859f9e5d12905db9872559460ccc9
oai_identifier_str oai:repositorio.ufsc.br:123456789/160790
network_acronym_str UFSC
network_name_str Repositório Institucional da UFSC
repository_id_str 2373
spelling Transfecção integrativa do gene da B-galactosidase em três espécies de leishmania e padronização de ensaio colorimétrico para triagem de compostos leishmanicida utilizando leishmania (V.) braziliensisBiotecnologiaLeishmanioseLeishmania brasiliensisBeta-galactosidaseAbsorção quimicaDissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2015As leishmanioses afetam cerca de 12 milhões de pessoas e constituem um problema de saúde mundial. Faz-se necessário o desenvolvimento de metodologias para o estudo de novas entidades químicas ativas contra a doença e que sejam menos laboriosas, mais rápidas, sensíveis e compatíveis com a automação. No presente trabalho, realizou-se a transfecção de forma integrativa do gene da ß-galactosidase em três espécies de Leishmania (L. (L.) infantum, L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis) com o objetivo de padronizar um ensaio colorimétrico rápido e sensível para triagem de compostos contra amastigotas intracelulares de L. (V.) braziliensis. A transfecção dos parasitos não alterou suas características biológicas avaliadas pelo crescimento de promastigotas em cultura, a infectividade para células THP-1 e para camundongos Balb/c em nenhuma das cepas transfectadas. A atividade da enzima medida através de ensaio colorimétrico mostrou correlação direta entre a leitura e o número de parasitos. A expressão da enzima foi estável nas linhagens selecionadas, mesmo na ausência da pressão do antibiótico de seleção, indicando a integração do gene que foi confirmado através de PCR. Ensaios de atividade enzimática utilizando promastigotas mostraram um limite inferior de detecção de 780 parasitos por cavidade, permitindo a determinação da atividade enzimática em amastigotas intracelulares. A transfecção em L. (V.) braziliensis não alterou a susceptibilidade aos fármacos leishmanicicas de uso clínico: anfotericina B e miltefosina. Contudo, o processo de transfecção provocou a resistência dos parasitos aos fármacos paromomicina e glucantime, 3 a 10 vezes acima da IC50 da cepa parental. Os resultados obtidos pela metodologia colorimétrica foram semelhantes aos obtidos pela metodologia clássica de contagem através de microscopia, pasronizando assim o ensaio.<br>Abstract : Leishmaniasis affects about 12 million people worldwide and represents a global health problem. It is necessary the development of less laborious, faster and more sensitive and compatible with automation methods for the study of new active compounds against the disease. In this present study, we transfeceted in a integrative form the ß-galactosidase in three species of Leishmania (L. (L.) infantum, L. (V.) braziliensis e L. (L.) amazonensis) aiming the standardization of a reproducible, fast and sensitive colorimetric assay for screening of compounds active against intracellular amastigotes using the transfected strain of L. (V.) braziliensis. Transfection did not alter the parasite?s biological characteristics evaluated by promastigote growth in culture, infectivity on THP-1 cells and on Balb/c mice for any of the transfected strain. The enzymatic activity measured by colorimetric assay showed direct correlation between the reading and the number of parasites. Enzymatic expression was stable under the selected strains even in the absence of the selection antibiotic pressure, indicating the integration of the gene, which was confirmed by PCR. Enzymatic activity assay using promastigotes showed a lower limit of 780 parasites per well, allowing the determination of the enzymatic activity in intracelular amastigotes. Transfection in L. (V.) braziliensis did not alter the susceptibility to the drugs: amphotericin B and miltefosine. However the trasnfection process led to resistance to the drugs paromomycin and glucantime, 3 to 10 times higher from the IC50 of the wild type parasite. Results obteinedby the colorimetric assay were similar to the ones obteined by the classical methodology of microscopic counting, validating the assay.Steindel, MarioUniversidade Federal de Santa CatarinaCosta, Danielle Tocantis Moura2016-04-19T04:21:08Z2016-04-19T04:21:08Z2015info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/masterThesis111 p.| il., grafs., tabs.application/pdf337984https://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/160790porreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2016-05-24T17:28:18Zoai:repositorio.ufsc.br:123456789/160790Repositório InstitucionalPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestopendoar:23732016-05-24T17:28:18Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false
dc.title.none.fl_str_mv Transfecção integrativa do gene da B-galactosidase em três espécies de leishmania e padronização de ensaio colorimétrico para triagem de compostos leishmanicida utilizando leishmania (V.) braziliensis
title Transfecção integrativa do gene da B-galactosidase em três espécies de leishmania e padronização de ensaio colorimétrico para triagem de compostos leishmanicida utilizando leishmania (V.) braziliensis
spellingShingle Transfecção integrativa do gene da B-galactosidase em três espécies de leishmania e padronização de ensaio colorimétrico para triagem de compostos leishmanicida utilizando leishmania (V.) braziliensis
Costa, Danielle Tocantis Moura
Biotecnologia
Leishmaniose
Leishmania brasiliensis
Beta-galactosidase
Absorção quimica
title_short Transfecção integrativa do gene da B-galactosidase em três espécies de leishmania e padronização de ensaio colorimétrico para triagem de compostos leishmanicida utilizando leishmania (V.) braziliensis
title_full Transfecção integrativa do gene da B-galactosidase em três espécies de leishmania e padronização de ensaio colorimétrico para triagem de compostos leishmanicida utilizando leishmania (V.) braziliensis
title_fullStr Transfecção integrativa do gene da B-galactosidase em três espécies de leishmania e padronização de ensaio colorimétrico para triagem de compostos leishmanicida utilizando leishmania (V.) braziliensis
title_full_unstemmed Transfecção integrativa do gene da B-galactosidase em três espécies de leishmania e padronização de ensaio colorimétrico para triagem de compostos leishmanicida utilizando leishmania (V.) braziliensis
title_sort Transfecção integrativa do gene da B-galactosidase em três espécies de leishmania e padronização de ensaio colorimétrico para triagem de compostos leishmanicida utilizando leishmania (V.) braziliensis
author Costa, Danielle Tocantis Moura
author_facet Costa, Danielle Tocantis Moura
author_role author
dc.contributor.none.fl_str_mv Steindel, Mario
Universidade Federal de Santa Catarina
dc.contributor.author.fl_str_mv Costa, Danielle Tocantis Moura
dc.subject.por.fl_str_mv Biotecnologia
Leishmaniose
Leishmania brasiliensis
Beta-galactosidase
Absorção quimica
topic Biotecnologia
Leishmaniose
Leishmania brasiliensis
Beta-galactosidase
Absorção quimica
description Dissertação (mestrado) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas, Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia e Biociências, Florianópolis, 2015
publishDate 2015
dc.date.none.fl_str_mv 2015
2016-04-19T04:21:08Z
2016-04-19T04:21:08Z
dc.type.status.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/publishedVersion
dc.type.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/masterThesis
format masterThesis
status_str publishedVersion
dc.identifier.uri.fl_str_mv 337984
https://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/160790
identifier_str_mv 337984
url https://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/160790
dc.language.iso.fl_str_mv por
language por
dc.rights.driver.fl_str_mv info:eu-repo/semantics/openAccess
eu_rights_str_mv openAccess
dc.format.none.fl_str_mv 111 p.| il., grafs., tabs.
application/pdf
dc.source.none.fl_str_mv reponame:Repositório Institucional da UFSC
instname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)
instacron:UFSC
instname_str Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)
instacron_str UFSC
institution UFSC
reponame_str Repositório Institucional da UFSC
collection Repositório Institucional da UFSC
repository.name.fl_str_mv Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)
repository.mail.fl_str_mv
_version_ 1808651981587218432