Produção de anticorpos monoclonais contra um fragmento recombinante da proteína estrutural do capsídeo do vírus da mionecrose infecciosa de camarões

Detalhes bibliográficos
Autor(a) principal: Borsa, Mariana
Data de Publicação: 2009
Tipo de documento: Trabalho de conclusão de curso
Idioma: por
Título da fonte: Repositório Institucional da UFSC
Texto Completo: https://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/132380
Resumo: TCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia.
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spelling Produção de anticorpos monoclonais contra um fragmento recombinante da proteína estrutural do capsídeo do vírus da mionecrose infecciosa de camarõesIMNVLitopenaeus vannameiproteína recombinanteanticorpo monoclonalTCC(graduação) - Universidade Federal de Santa Catarina. Centro de Ciências Biológicas. Biologia.O vírus da mionecrose infecciosa de camarões (IMNV) é um patógeno que determina elevadas perdas econômicas nas fazendas de cultivo no Brasil. Os principais sinais da enfermidade são necrose e opacidade dos músculos, além de letargia dos camarões infectados. O agente etiológico da enfermidade, o IMNV, é um vírus icosaédrico e não-envelopado, sendo a proteína estrutural que constitui o capsídeo viral tem aproximadamente 100 kDa e o genoma é constituído por RNA dupla fita que possui 7.560 pb. Métodos moleculares e histológicos de diagnóstico já foram estabelecidos, porém testes rápidos de diagnóstico como testes imunocromatográficos, que possam ser utilizados em campo, ainda não estão disponíveis. O presente trabalho teve como objetivo a clonagem e expressão heteróloga de um fragmento da proteína estrutural do IMNV e sua posterior utilização para a produção de anticorpos monoclonais. O RNA total do músculo esquelético de camarões Litopenaeus vanammei naturalmente infectados foi obtido e o cDNA foi produzido através de RTPCR, sendo posteriormente amplificado por PCR. Iniciadores específicos foram capazes de amplificar, através de PCR, um segmento de cDNA de 600 pb, correspondente a um fragmento da proteína estrutural do capsídeo do IMNV. O fragmento obtido foi clonado, seqüenciado e, posteriormente, sub-clonado no vetor de expressão pET-14b. Este plasmídeo de expressão foi utilizado para tranformação de bactérias E. coli BL21(DE3), com as quais foram realizados testes de expressão que possibilitaram a obtenção de uma banda protéica de 25 kDa. A confirmação da identidade da proteína heteróloga expressa foi verificada por SDS-PAGE e Western-blot. Após a purificação da proteína recombinante, esta foi utilizada na imunização de camundongos Balb/c, cujos esplenócitos foram utilizados na fusão com células de mieloma, para produção de hibridomas. A triagem dos hibridomas foi realizada através de ELISA indireto. Foram obtidos seis linhagens monoclonais produtoras de anticorpos anti-IMNV, sendo quatro anticorpos IgM (11D, 33G, 39G e 54H) e dois anticorpos IgG1 (13H, 46C). A reatividade dos anticorpos monoclonais contra extratos de tecido muscular de camarões infectados por IMNV foi avaliada através de Western blot, confirmando assim a especificidade dos anticorpos contra a proteína estrutural do IMNV. Estes anticorpos poderão ser utilizados futuramente para a produção de um kit de diagnóstico imunocromatográfico, que será útil para testes em campo, por ser uma estratégia rápida, específica e factível de ser utilizado em fazendas de cultivo de camarões.Florianópolis, SC.Pinto, Aguinaldo RobertoGrisard, Edmundo CarlosUniversidade Federal de Santa CatarinaBorsa, Mariana2015-04-29T20:46:55Z2015-04-29T20:46:55Z2009info:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/bachelorThesis77application/pdfhttps://repositorio.ufsc.br/xmlui/handle/123456789/132380porreponame:Repositório Institucional da UFSCinstname:Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)instacron:UFSCinfo:eu-repo/semantics/openAccess2015-04-30T22:36:20Zoai:repositorio.ufsc.br:123456789/132380Repositório InstitucionalPUBhttp://150.162.242.35/oai/requestopendoar:23732015-04-30T22:36:20Repositório Institucional da UFSC - Universidade Federal de Santa Catarina (UFSC)false
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