Avaliação da atividade anti-angiogênica do secretoma de Aspergillus fumigatus e de drogas antifúngicas

• Autor(a) principal: Xafranski, Hemílio [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4051423; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46264
• topic: Aspergillus fumigatus; Antifungal drugs; Angiogenesis; Fungal secretome; Biological activity; Aspergillus fumigatus; Antifungal drugs; Angiogenesis; Fungal secretome; Biological activity

Introdução: Aspergillus fumigatus é o agente etiológico mais isolado em aspergilose. A aspergilose pulmonar invasiva (AI) é uma importante causa de morbidade e mortalidade em pacientes imunocomprometidos enquanto aspergilose pulmonar crônico cavitária (ACC) acomete pacientes imunocompetentes com lesão pulmonar previa. A angiogênese é uma importante resposta fisiológica a estas duas formas clínicas de aspergilose. Desta maneira, os pacientes com AI desenvolvem necrose e hipóxia tecidual indicando uma inibição da angiogênese na área pulmonar afetada, enquanto os pacientes com ACC desenvolvem hemoptise importante indicando que a angiogênese não encontra-se inibida no sítio da infecção. Os fungos, particularmente A. fumigatus, produzem uma ampla variedade de metabólitos secundários e moléculas de interesse biotecnológico e farmacêutico. Neste contexto, é promissor o estudo de moléculas moduladoras da angiogênese produzidas por A. fumigatus visando o melhor entendimento da patogênese de aspergilose e a prospecção de moléculas com potencial farmacológico. Objetivos: O presente estudo tem como objetivo avaliar a modulação da atividade angiogênica pelo secretoma de amostras clínicas de Aspergillus fumigatus e de drogas comumente utilizadas no tratamento de aspergilose invasiva. Métodos: Foram selecionados 5 isolados de A. fumigatus provenientes de pacientes diagnosticados com AI e ACC para a obtenção do secretoma, avaliação da atividade anti-angiogênica, fracionamento e subfracionamento do secretoma, visando identificar frações do secretoma com atividade anti-angiogênica. Três métodos piloto de cultivo e obtenção do secretoma de A. fumigatus foram padronizados e os secretomas obtidos pelo método que se mostrou mais adequado (piloto 3) foram analisados por LC-MS. A capacidade destes secretomas de inibir a angiogênese foi avaliada em cultura de células RAEC por meio de ensaios de formação de tubo capilar em Geltrex®. O secretoma com atividade mais evidente de inibição da angiogênese foi submetido a fracionamento e subfracionamento com avaliação da atividade anti-angiogênica das frações geradas. Adicionalmente, a modulação da angiogênese por drogas antifúngicas foi avaliada em células endoteliais de aorta de coelho (RAEC) por ensaios de proliferação, migração e formação de tubos capilares. Resultados: Obtivemos sucesso na padronização de três metodologias reprodutíveis para a obtenção do secretoma de A. fumigatus. Para a prospecção de moléculas com atividade biológica o método piloto 3 mostrou-se o mais adequado. Apesar do baixo número de isolados incluídos, verificou-se a atividade anti-angiogênica dos secretomas de isolados de AI, que não foi verificada em isolados de ACC. Com esta metodologia obtivemos sucesso no isolamento de uma fração do secretoma de A. fumigatus com atividade anti-angiogênica e que não contém gliotoxina ou fumagilina, moléculas produzidas por fungos cuja atividade anti-angiogênica já foi descrita. Verificou-se a inibição da formação de tubos capilares, migração e proliferação de RAEC na presença de itraconazol e inibição da proliferação de RAEC na presença de posaconazol. Nossos achados destacam o potencial da investigação das moléculas secretadas por A. fumigatus para contribuir à compreensão da patogênese de aspergilose e ao isolamento de novas moléculas com atividade biológica.