Avaliação da interação entre o papilomavírus bovino e a célula hospedeira

• Autor(a) principal: Melo, Thatiana Correa de [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2015
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3109553; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47510
• topic: Papilomavírus bovino; Cultura primária; Expressão de proteínas do bpv; Vírus oncogênico; Clastogênese; Bovino; Papilomavírus bovino; Primary culture; Protein expression bpv; Oncogenic virus; Clastogenicity; Bovino

Os papilomavírus bovino (BPV) são vírus oncogênicos, com tropismo para o epitélio e mucosa, associados a lesões benignas que podem progredir à malignidade, principalmente quando na presença de co-fatores ambientais. Atualmente existem 13 tipos de BPVs descritos, classificados em três gêneros: Delta, Epsilon e Xipapillomavirus. Objetivo: Identificar a interação do BPV com células obtidas de culturas primárias e sangue periférico, provenientes de bovinos infectados, apresentando diferentes características clínicas da papilomatose. Métodos: A atividade viral foi avaliada através da análise de expressão de proteínas do BPV por RT- PCR, imunofluorescência, citometria de fluxo, alterações morfológicas e clastogênicas. Foram coletadas amostras de sangue e biópsias de animais não infectados pelo BPV e de animais infectados com o vírus, com papilomatose cutânea, papilomas de esôfago e papilomas de bexiga. Os fragmentos de tecido foram analisados histopatologicamente e, submetidos à detecção de DNA viral. Foram estabelecidos cultivos primários de cada grupo. Cada linhagem foi caracterizada de acordo com a morfologia, marcação de proteínas do citoesqueleto (vimentinas, citoqueratina, E- caderina, ?-catenia e actina) e adesão focal (vinculina), expressão da oncoproteína E7, proteínas de replicação (E2 e E1^E4) e do capsídeo (L1) do BPV, alterações clastogênicas, ciclo celular e investigação da presença de partículas virais nestes sistemas. Resultados e Discussão: Detectou-se a presença do DNA viral por PCR, sendo identificada por hibridização in situ a presença do genoma viral no estado epissomal em passagens celulares (P1-P6) dos cultivos estabelecidos. Além disso, a expressão da proteína E7 (região citoplasmática), das proteínas E2 e E1^E4 (núcleo e citoplasma) e da proteína L1 (região nuclear e perinuclear) foi observada nas células de cultivo primário e em células mononucleadas de sangue periférico (PBMCs). Estas mesmas proteínas foram detectadas por imunoistoquímica em tecido parafinado, sendo observada a expressão na região do epitélio e da derme. Níveis elevados de clastogenicidade foram identificados, tanto no cultivo quanto nos PBMCs, nos grupos de animais clinicamente afetados (papiloma cutâneo e papiloma interno). Análises de microscopia eletrônica evidenciaram a presença de estruturas similares a partículas virais. As células de cultivo dos grupos clinicamente afetados por BPV apresentaram dupla marcação de vimentina/citoqueratina e padrão de marcação alterado de E-caderina e ?- catenina. A ??catenina se mostrou expressa no citoplasma e no núcleo. Estes dados sugerem que essas células se encontram em transição epitélio-mesênquima (TEM). A TEM é responsável pela invasão/migração de células com fenótipo cancerígeno, contribuindo na gênese de metástases. As células cultivadas com BPV possuíam: F-actina nuclear e F- actina despolimerizadas e retraídas na matriz celular. Além disso, foi observada a formação de lamelipóidios. Provavelmente estas alterações são decorrentes da atividade de proteínas virais. Conclusões: A presença de DNA do vírus nas passagens, alterações morfológicas e clastogênicas, bem como a presença de supostas partículas do BPV e expressão de proteínas representam evidências de que o vírus pode estar se montando e mantendo atividade in vitro. Alterações tanto das proteínas do citoesqueleto, quanto a co-expressão de proteínas de origem epitelial e mesenquimal apontam para as primeiras modificações celulares de um processo de desenvolvimento neoplásico.