Técnicas de biologia molecular para ceratites infecciosas

• Autor(a) principal: Salomão, Heloisa Moraes do Nascimento [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5279399; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50592
• topic: Ceratite; Diagnóstico; Reação em cadeia de polimerase; Infecção; Córnea; Keratitis; Diagnosis; Polymerase chain reaction; Infection; Cornea

Objetivo: Avaliar a aplicação de técnicas de biologia molecular para estudo da microbiota conjuntival e diagnóstico etiológico em portadores de ceratites infecciosas por alpha Herpes vírus e por Mycobacteria. Métodos: A análise da microbiota conjuntival foi feita pela colheita de amostras da superfície ocular em olhos submetidos previamente a implante de ceratoprótese Boston tipo 1 pela PCR com análise de amplicon acoplada a espectrometria de massas com fonte de ionização electrospray (PCR/ESI-MS). Para estudo de infecção viral da córnea utilizou-se a PCR em tempo real para vírus Herpes Simplex tipo 1 e 2 (HSV 1 e 2) e Vírus Varicella Zoster (VZV) em amostras obtidas de lesões dendríticas típicas de infecção viral e do estroma corneano de pacientes com suspeita diagnóstica de ceratite infecciosa inespecífica. A PCR de restrição enzimática do gene hsp65, o sequenciamento por DNA, genotipagem e eletroforese em gel de campo pulsado foram usados para identificação das cepas que foram isoladas de amostras da córnea em um surto de infecção por Mycobactéria após cirurgia refrativa. A mesma metodologia foi utilizada para estudo das cepas isoladas do ambiente cirúrgico em que ocorreu o surto. Resultados: O diagnóstico molecular pela PCR/ESI-MS foi comparável às técnicas microbiológicas tradicionais para avaliação pós-operatória de vigilância da microbiota ocular em pacientes submetidos previamente a implante de ceratoprótese Boston tipo I. O qPCR foi positivo em 84% dos pacientes com ceratites dendríticas típicas de infecção viral e em dez dos sessenta e cinco pacientes suspeitos de etiologia infecciosa não específica com cultura positiva para bactéria. Nove foram positivos para HSV-1 e um para VZV. Nenhum paciente teve resultado positivo para a pesquisa de HSV-2. A PCR de análise de restrição enzimática do gene hsp65, sequenciamento por DNA e eletroforese em gel de campo pulsado foram aplicadas de forma a complementar os testes de cultivo no diagnóstico de Mycobactéria nos olhos com sinais clínicos de infecção. Foi isolada a mesma cepa de M. chelonae dos olhos dos pacientes nas amostras de água corrente submetidas a processo de destilação, o que sugere que a fonte de contaminação do surto possa ter sido a água destilada usada para lavagem dos instrumentos cirúrgicos. Conclusões: O uso da PCR/ESI-MS foi eficaz para avaliação da microbiota conjuntival e é uma possibilidade de acompanhamento pós-operatório. Com PCR em tempo real foi possível demonstrar a presença de Herpes vírus em casos típicos de ceratites dendríticas herpéticas e infecciosas inicialmente diagnosticadas como de etiologia bacteriana, sugerindo infecção mista. A PCR de análise de restrição enzimática do gene hsp65, o sequenciamento de DNA e a eletroforese em gel de campo pulsado foram importantes na identificação de Mycobacterium chelonae em um surto após cirurgia refrativa. A biologia molecular pode ser aplicada a investigação de situações de infecção do olho trazendo informações que contribuem para a compreensão da origem e correlação dos processos infecciosos.