Estudo da modulação das células mielóides supressoras no adenocarcinoma metastático após terapia antiangiogênica

• Autor(a) principal: Chaves, Karen Cristina Barbosa [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4814016; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47700
• topic: Carcinoma renal; Células mielóides supressoras; Metástase pulmonar; Terapia gênica; Endostatina; Renal cell carcinoma; Myeloid-derived suppressor cells; Pulmonary metastasis; Gene therapy; Endostatin

O carcinoma de células renais (CCR) é a terceira causa de morte de câncer geniturinário. Esse câncer é altamente vascularizado e resistente a radioterapia e quimioterapia. As drogas antiangiogênicas são promissoras e amplamente utilizadas na clínica, porém mecanismo de resistência anti-tumoral tem sido desencadeado com o anticorpo anti-VEGF. Estudos relatam que a resistência ao tratamento de pacientes com câncer está relacionada à presença de células mielóides supressoras. A endostatina (ES) é um fragmento de colágeno XVIII que possui atividade antiangiogênica, porém seus mecanismos de ação não são elucidados. Nesse estudo, rastreamos células Gr-1+ em específicos órgãos do camundongo sadio, avaliamos a importância das células CD11b+Gr-1+ e seus subtipos durante a progressão metastática e examinamos o potencial da terapia com ES na modulação de células CD11b+Gr-1+ e em seus subtipos bem como a atividade imunossupressora na metástase pulmonar. Camundongos Balb/c sadios foram utilizados na detecção de células Gr-1+ separadas magneticamente. Camundongos Balb/c com CCRm foram nefrectomizados no dia 7 e coletados o pulmão metastático, baço e medula óssea após 3, 7 e 10 dias. A quantificação das células CD11b+Gr-1+ e os subtipos, monocítica e granulocítica, foi realizada por citometria de fluxo e análises microscópicas foram visualizadas em coloração de HE. Camundongos Balb/c com CCRm foram tratados com células NIH/3T3-LendSN-clone 5 ou com NIH/3T3-LXSN, como controle. A dosagem de ES foi realizada através de ELISA e do G-CSF através do milliplex. A quantificação de células CD11b+Gr-1+ e os subtipos foi realizada por citometria de fluxo. As células Gr-1+ separadas, magneticamente, foram avaliadas in vitro a dosagem de nitrito no sobrenadante e da atividade de arginase nas células, através de ensaios colorimétricos. E, a produção de EROs foi quantificada em células CD11b+Gr-1+ com o marcador DCFDA por citometria de fluxo. Nossos dados, mostraram a presença de células Gr-1+ tanto na medula óssea quanto no rim, pulmão e baço, confirmando as morfologias mononuclear e polimorfonuclear. No modelo de progressão metastática, verificamos a expansão de células CD11b+Gr-1+ e, preferencialmente, do subtipo granulocítica na medula óssea. Notamos o progressivo acúmulo de células CD11b+Gr-1+ no baço e o oposto nos pulmões metastáticos. A terapia gênica com ES induziu à redução de lesões metastáticas no pulmão, de células CD11b+Gr-1+ e do subtipo granulocítica. A redução dessas células foi refletida na diminuição dos níveis plasmáticos de G-CSF, levando à diminuição da produção de EROs pelas células granulocíticas. Assim, mostramos que a progressão metastática é inversamente proporcional ao número de células CD11b+Gr-1+ presentes no microambiente tumoral, mostrando que o subtipo granulocítica tem participação na metástase avançada. O tratamento com ES induziu uma resposta imune anti-tumoral prejudicando o recrutamento de células mielóides supressoras produtoras de EROs ao sítio metastático.