Nova estratégia para descoberta de anti-helmínticos utilizando o organismo modelo Caenorhabditis elegans

• Autor(a) principal: Cintra, Giovana Aparecida De Souza [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2019
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=8041821; https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/59355
• topic: C. Elegans; Anti-Helmínticos; Descoberta De Drogas; Triagem De Alto Conteúdo

As doenças causadas por helmintos transmitidos pelo solo estão entre as infecções mais comuns no mundo, afetando majoritariamente populações marginalizadas, de baixa renda e com poucos recursos. Estima-se que mais de um bilhão de pessoas, principalmente em países em desenvolvimento da África, Ásia e América, estão infectadas com uma ou mais espécies de helmintos. A seleção de linhagens resistentes aos principais anti-helmínticos utilizados destaca a necessidade da introdução de novos agentes terapêuticos. O nematoide de vida livre Caenorhabditis elegans é amplamente reconhecido como um organismo modelo para a investigação da biologia de nematoides parasitas devido ao seu fácil cultivo em laboratório, tempo de geração curto e gen oma completamente sequenciado. A maioria dos antihelmínticos comercializados é ativo contra C. elegans, por exemplo os derivados do levamisol e benzimidazol, e este modelo animal tem sido útil no entendimento do mecanismo de ação dos mesmos, tornando-o um útil sistema para seleção e investigação de compostos com potencial atividade anti-helmíntica. As metodologias atualmente usadas para identificar novos compostos baseiam-se na avaliação subjetiva da motilidade dos vermes, ou envolve organismos transgênicos. Dessa maneira, existe a necessidade do estabelecimento de um ensaio biológico mais objetivo, sensível e reprodutível. No presente estudo é descrito o desenvolvimento e padronização de uma nova metodologia de triagem in vivo de alto conteúdo com base no modelo de C. elegans. O ensaio baseia-se na avaliação da viabilidade por meio da incorporação diferencial de dois marcadores moleculares fluorescentes, o DB-1, derivado do núcleo 2,1,3-benzotiadiazol e o iodeto de propídeo. Esse modelo destaca-se dos ensaios anteriores por utilizar uma plataforma de imageamento automatizada e posterior análise das imagens por um software comercial, assim avaliando quantitativamente a viabilidade de forma objetiva. Além disso, possibilita o uso de animais sem modificações genéticas. O estabelecimento de um ensaio robusto e reprodutível permitiu a triagem de 2280 compostos, os quais fazem parte de três bibliotecas: (i) a biblioteca comercial LOPAC, da qual foram selecionados três compostos com potencia até 400x maior que o cloridrato de levamisol; (ii) a biblioteca de compostos/extratos de diferentes colaboradores, com classes terapêuticas e químicas inéditas; (iii) a biblioteca Pathogen Box, da qual foram identificados três compostos previamente descritos com atividade contra malária, esquistossomose e tuberculose. Os candidatos identificados nesse trabalho são ponto de partida para estudos de química medicinal, visando melhorar a potencia e eficácia das mesmas. Destaca-se ainda, que dois dos compostos selecionados na triagem de colaboradores reduziram a carga parasitária no modelo in vivo de infecção com Ascaris sum em cerca de 60%, confirmando o valor translacional do modelo biológico C. elegans. Em suma, conclui-se que o ensaio desenvolvido nesse trabalho foi estabelecido com sucesso, e traz uma sólida contribuição para as fases iniciais da descoberta de novos fármacos para helmintíases.