Perfil de expressão de pequenos RNAs provenientes de exossomos de pacientes em Primeiro Episódio Psicótico

• Autor(a) principal: Xavier, Gabriela [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2021
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/61978
• topic: Primeiro Episódio Psicótico; Pequenos RNAs; Vesículas extracelulares; Expressão Gênica; microRNAs; piRNAs; tRNAs e derivados

A Esquizofrenia é uma doença psiquiátrica grave, multifatorial e poligênica. O primeiro episódio psicótico é considerado o início desta doença e é uma fase extremamente interessante para estudo, uma vez que os pacientes apresentam altos níveis de sintomas e, muitas vezes, encontram-se livres de tratamento antipsicótico. Genes regulatórios, como de pequenos RNAs tem sido cada vez mais relacionados à doença. Estes pequenos RNAs podem ser encontrados não apenas dentro das células, mas também no meio extracelular (em fluidos biológicos) tanto na sua forma livre quanto encerrados em vesículas extracelulares. Os exossomos são pequenas vesículas extracelulares capazes de carregar estes RNAs, proteínas e lipídeos, através dos fluidos biológicos, por todo o corpo. Estas vesículas apresentam ainda capacidade de atravessar a barreira hematoencefálica. Nesta tese, buscamos investigar o conteúdo de pequenos transcritos presente em vesículas extracelulares séricas, além de investigar a expressão de pequenos RNAs nestas vesículas e de correlacionar os RNAs diferencialmente expressos às escalas diagnósticas. Dentre os pequenos RNAs, pudemos observar a predominância de miRNAs e tRNAs no conteúdo de vesículas extracelulares. Eles representam, em média, 16 e 4%, respectivamente, dos transcritos encontrados nas vesículas. Dois miRNAs mostraram-se diferencialmente expressos na comparação entre grupos (miR-335-5p e miR-30d-5p), sendo o miR-30d-5p correlacionado negativamente com a escala clínica CDSS. Além disso, ambos apresentaram AUC maior que 90% no teste de sensibilidade e especificidade. Encontramos também tRNAs diferencialmente expressos em nossas amostras. O tRNALeuAAG-7-1, apresentou maior expressão em pacientes (antes e após tratamento) quando comparados aos controles, no entanto, o uso de antipsicótico parece ter um efeito sobre sua expressão. Outros quatro tRNAs mostraram-se diferencialmente expressos entre pacientes antes e após tratamento e o uso da risperidona pareceu ter efeito sobre a expressão destes, assemelhando-as à de controles. Investigamos ainda o conteúdo proteico presente em membranas de vesículas extracelulares liberadas por diversos tipos de células neurais, geradas a partir de células pluripotentes induzidas de pacientes com esquizofrenia e doença de Alzheimer de acometimento tardio. A análise de 34 epítopos revelou, em doadores saudáveis, o aumento dos epítopos CD29, CD44, CD49e, CD146, MSCP e SSEA-4 em vesículas extracelulares coletadas em meio de cultura de astrócitos, microglia e células neurais progenitoras (NPCs) quando comparados a outros tipos celulares. Os dois estudos contidos nesta tese apresentam resultados relevantes e de alto potencial na busca por marcadores tanto para a esquizofrenia (em suas fases mais precoces ou em fase crônica) quanto para o acompanhamento do tratamento desta doença, mas necessitam ainda de replicação em outras amostras e confirmação por diferentes metodologias.