Caracterização estrutural e funcional da glicoproteína ssp-4 de formas amastigotas de trypanosoma cruzi

• Main Author: Florentino, Pilar [UNIFESP]
• Publication Date: 2016
• Format: Doctoral thesis
• Language: por
• Source: Repositório Institucional da UNIFESP
• Download full: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4235076; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47999
• topic: Trypanosoma cruzi; GAL-3; Mab1d9; Trypanosoma cruzi; GAL-3; Mab1d9

Trypanosoma cruzi é o agente etiológico da doença de Chagas, de grande relevância na América Latina. Atualmente, este protozoário está subdividido em seis linhagens distintas, Tc I a Tc VI, com base em estudos moleculares. Em seu ciclo de vida heteroxeno, T. cruzi alterna entre estágios evolutivos que apresentam diferenças bioquímicas e morfológicas: as formas epimastigotas, tripomastigotas e amastigotas; os tripomastigotas metacíclicos e sanguíneos são as formas infectivas clássicas. No entanto, sabe-se que amastigotas derivados de tripomastigotas, independente do estágio intracelular no mamífero, são também capazes de infectar células in vitro. Estes amastigotas extracelulares (AEs) apresentam um antígeno de superfície específico de amastigotas (Ssp-4), glicoproteína entre 70-100 kDa ancorada à membrana por glicosilfosfatidilinositol (GPI) e reconhecida pelos anticorpos monoclonais (mAb) 2C2 e 1D9. Sabe-se, também, que Ssp-4 é liberada progressivamente para o ambiente extracelular. No presente estudo, foi evidenciado que AEs secretam vesículas, quando aderidos à superfície de células fagocíticas não profissionais, e que o material secretado por estes parasitas, associado ou não a vesículas, pode modular a sua infectividade. Para caracterizar aspectos funcionais de Ssp-4, primeiramente a sequência de aminoácidos da glicoproteína foi identificada. Em seguida, observou-se que a expressão de transcritos RNAm e proteica de Ssp-4 é maior em AE de cepa menos infectiva. No entanto, a distribuição de carboidratos de Ssp-4 apresenta-se polimórfica entre diferentes cepas/isolados de T. cruzi. Assim, evidenciou-se uma correlação entre infectividade de AE e a expressão dos epítopos de carboidrato definidos por mAb1D9 e 2C2: parasitas mais infectivos (cepa G) apresentam alta reatividade com mAb1D9 e baixa reatividade com mAb2C2; inversamente, parasitas menos infectivos (cepa CL) têm maior reatividade com mAb2C2 e menor com mAb1D9. Por último, foi investigado se a interação de AE poderia ocorrer via antígeno de carboidrato associado a Ssp-4, definido por mAb1D9. Dessa forma, observou-se que a internalização de AE recruta para a taça de invasão galectina-3 (Gal-3), lectina que se liga especificamente a ?-galactosídeos. Foi demonstrado que Gal-3 interage com o antígeno de superfície definido por mAb1D9. Para tanto, os resultados desta tese revelam que Ssp-4 é secretada associada ou não a vesículas e que, apesar de ser menos expressa em parasitas mais infectivos,apresenta distribuição polimórfica dos epítopos de carboidrato que se reflete na infectividade de AE por células fagocíticas não profissionais.