Análise de citocinas e fatores de crescimento secretados por células progenitoras do limbo e ação na modulação da cicatrização corneal in vitro e in vivo

• Autor(a) principal: Loureiro, Renata Ruoco [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=10053077; https://hdl.handle.net/11600/64861
• topic: Cornea limbus; Peptides and intercellular signaling proteins; Cytokines; Paracrine communication; Wound healing; Limbo da córnea; Peptídeos e proteínas de sinalização intercelular; Citocinas; Comunicação parácrina; Cicatrização

A manutenção do epitélio da córnea é determinada por uma população distinta de células progenitoras ou células-tronco (CTs), que estão localizadas na camada basal do límbico córneo-escleral. Uma variedade de condições patológicas, como síndrome de Stevens-Johnson, Penfigoide cicatricial e queimadura ocular, pode destruir as CTs do limbo causando a deficiência das células-tronco do limbo (DCTL). O cultivo e transplante ex vivo de células epiteliais do limbo tem sido relatado como fonte alternativa para a reconstrução da superfície ocular. Porém, até agora, a melhora funcional destes pacientes ainda é limitada, devido à baixa taxa de sobrevivência das células transplantadas. Consequentemente, os benefícios clínicos desta estratégia terapêutica são apenas transitórios e podemos atribuí-los aos efeitos parácrinos associados às células transplantadas. Baseado neste cenário, objetivou-se identificar os fatores de crescimento secretados por CTs do limbo corneal e analisar sua ação na modulação da cicatrização epitelial, tanto in vitro como in vivo. Os tecidos límbicos e corneais foram obtidos a partir de anéis corneoesclerais remanescentes da trepanação de córneas previamente utilizadas em cirurgias de transplante de córnea. Os fatores de crescimento secretados por CTs do limbo foram identificados por ELISA e Multiplex no meio condicionado (MC). Para análise in vitro da migração epitelial, células epiteliais da córnea foram cultivadas e tratadas com o MC previamente coletado de culturas de epitélio límbico, e sua migração foi analisada por microscopia invertida e captura de imagens. Em uma próxima etapa, foram estabelecidos os parâmetros necessários para a transposição do modelo experimental ao pré- clínico com a aplicação tópica de MCs sobre a córnea para o tratamento de DCTL com modelo experimental de ratos. Nos ensaios in vitro, as células epiteliais corneais tratadas com o MC de fibroblastos do limbo (MC FL) apresentaram migração mais rápida e progressiva entre 12 e 60h de análise quando comparado ao tratamento feito com meio fresco (MF). Além disso, o MC FL mostrou-se mais eficaz quando comparado aos demais MCs testados. A dosagem de fatores de crescimentos mostrou altas concentrações de keratinocyte growth factor (KGF) e hepatocyte growth factor (HGF), fatores relacionados à migração e proliferação de células progenitoras epiteliais, no MC FL. No experimento in vivo, os animais tratados com MC FL apresentaram melhora do defeito epitelial, manutenção da espessura e menor índice de opacidade e neovascularização da córnea. Este tratamento também possibilitou melhor organização tecidual da superfície ocular quando comparado aos demais tratamentos testados.