Prevalência e contexto genético de 16S rRNA metiltransferases em bacilos gram-negativos isolados no complexo Hospital São Paulo

• Autor(a) principal: Corsi, Dandara Cassu [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3900270; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47712
• topic: Resistência aos aminoglicosídeos; Metiltransferases; rmtB; Bacilos gram-negativos; Resistance to aminoglycosides; 6s methyltransferases; rmtB; Gram-negative bacilli

Os aminoglicosídeos têm sido cada vez mais utilizados no tratamento de infecções por bactérias resistentes às demais classes de antimicrobianos. A produção de 16S rRNA metiltranferases vem sendo um motivo preocupação, pois são responsáveis aos altos níveis de resistência a esta classe de antimicrobiano, limitando ainda mais as opções teurapêuticas. Objetivo: Caracterizar as amostras bacterianas gram-negativas produtoras de 16S rRNA metiltransferases. Metodologia: Foram analisadas todas as amostras bacterianas gram-negativas isoladas no Complexo Hospital São Paulo/UNIFESP no período de outubro a dezembro de 2014. Os isolados que apresentaram redução da sensibilidade aos aminoglicosídeos pelo sistema Phoenix ou por técnicas manuais foram submetidos à confirmação deste fenótipo pela técnica de ágar diluição (teste triagem) para amicacina, gentamicina e tobramicina, seguindo os pontos de corte estabelecidos pelo CLSI (2015). As amostras resistentes aos três aminoglicosídeos foram submetidas à reação de PCR para a verificação da presença de 16S rRNA metiltransferases, que posteriormente foram submetidas ao teste de microdiluição em caldo para determinação da CIM às demais classes de antimicrobianos. A avaliação de similaridade genética dos isolados produtores de 16S rRNA metiltransferases foi determinada pela técnica de PFGE. Por se tratar da disseminação de um único clone, foram selecionados apenas dois isolados para a determinação do MLST. Os testes de conjugação e transformação foram realizados neste estudo. Os plasmídeos carreadores de rmtB-1 de três isolados [duas K. pneumoniae, (com e sem blaKPC-2) e o isolado de P. mirabilis] foram sequenciados. Resultados: Dentre as 1248 amostras consecutivas isoladas, 55 foram resistentes aos três aminoglicosídeos testados, sendo que 22 amostras de K. pneumoniae e um isolado de P.mirabilis eram produtores de RmtB-1. Além disso, 4 amostras de P. aeruginosa foram produtoras de RmtD-1. Estes isolados apresentaram CIMS >128 ?L/mL para os aminoglicosídeos. Apenas um isolado de K. pneumoniae (A64.216) e o isolado de P. mirabilis (64.421) foi sensível a maioria dos carbapenêmicos. Os isolados produtores de RmtB-1 foram também positivos para o gene blaCTX-M-1/2, blaSHV, blaTEM. Entretanto, apenas 6 isolados foram positivos para o gene blaCTX-M-14, e apenas 2 isolados foram negativos para blaKPC (um isolado de K. pneumoniae-A64.216 e o isolado de P. mirabilis). O gene blaSPM-1 foi identificado em todos as amostras de P. aeruginosa produtoras de RmtD. Tanto os isolados de K. pneumoniae,quanto os isolados de P. aeruginosa, apresentaram o mesmo perfil clonal. As amostras de K. pneumoniae pertenciam ao ST258. Não foi obtido transconjugante ou transformante dos isolados testados. De acordo com os sequenciamentos dos plasmídeos, o gene rmtB-1 está inserido em transposon, flanqueado pelo gene blaTEM, ao lado de um integron de classe 1. Conclusões: A prevalência de isolados gram-negativos carreadores de genes codificadores de metiltransferases no Complexo do Hospital São Paulo é baixa. O sequenciamento dos plasmídeos elucidou a localização e o contexto no qual rmtB-1 encontra-se inserido, bem como a de outros genes de resistência e virulência, além dos genes necessários para a replicação e transferência. Os plasmídeos de K. pnuemoniae foram classificados como IncFIIk. O plasmídeo do P. mirabilis foi considerado como não-tipável e o pasmídeo do blaKPC-2 apresentou um resultado duvidoso.