Investigação da prevalência de mutações e fusões de genes que codificam efetores da via mapk e sua correlação com características clinico-patológicas e perfil de expressão em carcinomas papilíferos da tiroide

• Autor(a) principal: Bastos, André Uchimura [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=4352912; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46618
• topic: BRAF; RET; NTRK3; ALK; Carcinoma papilífero da tiroide; Fatores clínico-patológicos; BRAF; RET; NTRK3; ALK; Carcinoma thyroid papillary; Clinical-pathological factors

O carcinoma papilífero da tiroide (CPT) é o subtipo mais prevalente entre os carcinomas da tiroide, correspondendo a aproximadamente 80% dos casos. A sua prevalência tem aumentado nos últimos anos, principalmente devido ao aumento de microcarcinomas papilíferos da tiroide (CPT ?10 mm, MCPT). Nas últimas décadas, ficou evidente que alterações genéticas que levam a ativação da via MAPK (do inglês, Mitogen-Activated Protein Kinase), uma cascata de sinalização que regula proliferação, diferenciação e sobrevivência celular, são altamente prevalentes em CPT. Alterações nos genes que codificam para proteínas desta via perfazem um total de aproximadamente 70% dos casos de CPT e incluem rearranjos cromossômicos do tipo RET/PTC ou NTRK, e mutações nos genes RAS ou BRAF. Além destas alterações, novas fusões envolvendo tirosinas quinases foram descritas recentemente pelo The Cancer Genome Atlas (TCGA). Contudo, em uma parcela dos casos de CPTs o evento genético associado a patogênese (alteração driver) ainda é desconhecido. Com o objetivo de caracterizar os eventos genéticos associados a patogênese do CPT na população brasileira, nosso grupo investigou a prevalência da mutação BRAF V600E em uma casuística de 120 CPTs. Além da determinação da prevalência dessa alteração (48%; n=58), observamos a associação com subtipo histológico, características clínico-patológicas associadas a agressividade e perda da expressão dos genes de captação e metabolismo do iodo (NIS e TSHR). Estes dados, associados aos reportados na literatura, sugerem que BRAF V600E é um marcador de pior prognóstico. Nos trabalhos que deram origem a esta tese, inicialmente investigamos a prevalência das fusões RET/PTC, que constituem a segunda alteração genética mais frequente no CPT, bem como avaliamos a expressão dos genes TPO, PDS e TG. Fusões envolvendo o gene RET (RET/PTC1, RET/PTC2 e RET/PTC3) foram identificadas em 27% (32/118) dos CPTs. Não houve associação entre RET/PTC, expressão dos genes associados a captação e metabolismo de iodo e características clínico-patológicas associadas a agressividade. De fato, o papel de RET/PTC como marcador de prognóstico ainda é controverso. Além de NIS, previamente reportado, neste estudo demonstramos que a mutação BRAF V600E também está associada com a perda da expressão de TPO. Ainda, identificamos a presença da mutação no códon 61 de NRAS em 9% (11/118) dos CPTs. Quando avaliamos as alterações genéticas nos MCPT (n=40), não encontramos nenhuma associação com características clínico-patológicas associadas à agressividade, porém verificamos que a mutação BRAF V600E encontra-se associada a uma expressão diminuída de NIS e TPO. Ainda, quando dividimos os MCPT em dois subgrupos (<7 mm vs ?7 mm) verificamos que os MCPTs ?7 mm, apresentam maiores taxas de extensão extra-tiroidiana, metástase para linfonodos e recorrências, e que a diminuição da expressão de NIS e TPO é muito mais evidente neste grupo. Isto é provavelmente devido ao acúmulo de MCPTs com BRAF V600E no subgrupo ?7 mm. Esses dados são similares aos encontrados em tumores maiores do que 10 mm, mais agressivos, o que sugere que, apesar de MCPTs serem, na maioria das vezes, clinicamente indolentes, o subgrupo de 7-10 mm com BRAF V600E poderia ser tratado de maneira semelhante aos CPT convencionais com BRAF V600E. Na segunda fase deste estudo, avaliamos a presença das fusões ETV6-NTRK3, STRN-ALK e AGK-BRAF, eventos recorrentes nos CPTs e que são capazes de ativar a via MAPK. Também investigamos a presença de mutação nos genes HRAS e KRAS (códons 12, 13 e 61), e apenas uma das amostras foi positiva para HRAS (Q61R). ETV6-NTRK3 foi identificado em 5% (6/116) dos CPTs. ETV6-NTRK3 foi encontrado exclusivamente na variante folicular do CPT (CPTVF), o que leva a uma prevalência de 16% (6/45) nesta variante. Este dado é interessante, visto que a maior parte da ?dark-matter? é composta por tumores desta variante. Além disso, investigamos inicialmente se essa alteração teria alguma associação com a presença de cápsula. ETV6-NTRK3 foi encontrado em ambas as variantes, encapsulada e infiltrativa, em 50% cada. Como foi recentemente sugerido uma nova nomenclatura para CPTVF encapsulados sem nenhum tipo de invasão, denominados neoplasia folicular não-invasiva com características nucleares papilíferas (NIFTP, do inglês Non- Invasive Follicular Thyroid neoplasia with Papillary-like nuclear features), a relação entre ETV6-NTRK3 e a variante NIFTP ainda precisa ser melhor investigada. STRN-ALK foi identificado em 3% (4/116) dos CPT, e foi encontrado tanto em CPT clássico como CPTVF. Não foi encontrada associação com características clinico-patológicas associadas a agressividade. Não encontramos nenhuma amostra positiva para AGK-BRAF nesta casuística. Este achado corrobora para a proposição de que AGK-BRAF é um evento provavelmente associado com CPTs de pacientes pediátricos. Este screening inicial permitiu identificar que 27% (n=30) das amostras foram negativas para BRAF V600E (e códons adjacentes), NRAS Q61, HRAS (códons 12, 13 e 61), KRAS (códons 12, 13 e 61), RET/PTC1, RET/PTC2, RET/PTC3, ETV6-NTRK3, STRN-ALK e AGK-BRAF. Nossos dados contribuem para o melhor entendimento da patogênese do CPT e reúne dados importantes para a utilização das variadas alterações como marcadores de prognóstico do CPT. Juntamente com outros artigos já publicados, e artigos que futuramente serão publicados realizados em várias outras populações, esperamos que estes dados possam contribuir para estabelecer diretrizes eficientes para o manejo e tratamento dos pacientes com carcinoma papilífero da tiroide.