Contribuição da via extracelular AMPc-adenosina para o acoplamento do adrenoceptor beta2 com proteínas Gs e Gi no músculo esquelético

• Autor(a) principal: Duarte, Thiago [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22587
• topic: Animais; AMP Cíclico; Contração Muscular/efeitos de drogas; Músculo Esquelético/efeitos de drogas; Camundongos; Animais

Trabalhos anteriores do nosso grupo mostraram que, no musculo esqueletico, a formacao intracelular do AMPc induzida por agonistas de adrenoceptores Beta2 e seguida pelo efluxo do nucleotideo ciclico e pela degradacao extracelular em adenosina. No entanto, ate o presente momento, a funcao da via denominada ovia extracelular AMPc-adenosinao no musculo esqueletico nao era conhecida. Assim, este trabalho teve como objetivo estudar a participacao da via extracelular AMP ciclico adenosina na regulacao da contracao muscular esqueletica. Para isso utilizamos preparacoes de musculo diafragma de camundongo, as quais foram submetidas a estimulacao eletrica transmural com duracao de 2 ms, frequencia de 0,1 Hz e voltagem supra maxima. Os objetivos especificos do trabalho foram: 1) Avaliar o decurso do efeito inotropico positivo do agonistas de adrenoceptor Beta2 clenbuterol; 2) Determinar a possivel contribuicao da ovia extracelular AMPc u adenosinao no efeito inotropico positivo induzido pela ativacao de adrenoceptores Beta2 e, no acoplamento promiscuo do adrenoceptor Beta2 com as proteinas Gs e Gi. Nossos resultados mostraram que o clenbuterol promoveu um efeito inotropico positivo transitorio com efeito maximo apos 30 min da estimulacao. A fase descendente do efeito inotropico do agonista Beta2, foi tambem observada apos estimulacao direta da adenilil ciclase com forscolina ou da inibicao da fosfodiesterase 4 com rolipram. A fase descendente do efeito inotropico do clenbuterol e dependente do efluxo de AMPc, visto que foi abolido pela probenecida, inibidor dos transportadores de anions organicos. Nossos dados mostraram ainda que o AMPc e capaz de alterar a contracao muscular induzida por estimulacao eletrica, mas que a resposta final do AMPc depende do sitio de acao do nucleotideo ciclico: inotropismo negativo por uma acao extracelular e inotropismo positivo pela acao intracelular. O mecanismo de acao extracelular do AMPc depende da degradacao do nucleotideo ciclico em adenosina ja que o efeito inotropico negativo foi abolido pela inibicao da enzima ecto-5Æ-nucleotidase com AMPCP. Alem disso, a inibicao dos receptores de adenosina tanto com CGS-15943 (antagonista nao seletivo) como com DPCPX (antagonista seletivo do receptor A1) praticamente aboliu o efeito inotropico negativo do AMPc e a fase descendente do efeito inotropico da forscolina e do clenbuterol. Esses dados demonstram que o efeito inotropico negativo do AMPc, e a fase descendente dos efeitos inotropicos da forscolina e do clenbuterol, envolvem a ativacao de receptores A1 de adenosina, acoplados a proteina Gi. Finalmente, a analise da contracao do diafragma medida na presenca da toxina pertussis mostraram que, no musculo esqueletico, o acoplamento do adrenoceptor Beta2 com a proteina Gi e indireto, via efluxo de AMPc e subsequente ativacao do receptor A1 de adenosina. Em conjunto, os resultados aqui apresentados mostram que a via extracelular AMPc-adenosina e responsavel pelo controle fino da contracao muscular esqueletica, caracterizando o AMPc como um nucleotideo ciclico que poderia minimizar possiveis efeitos deleterios decorrentes da contracao muscular exacerbada.