Moléculas de superfície liberadas pelas formas metacíclicas do Trypanosoma cruzi modulam negativamente a invasão celular

• Autor(a) principal: Clemente, Tatiana Mordente [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Tese
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3618204; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/47283
• topic: Tripomastigotas metacíclicas (tms); Trypanosoma cruzi; Metacyclic trypomastigote (mt)

Moléculas liberadas por microrganismos patogênicos podem modular sua interação com os hospedeiros. Nós investigamos se formas tripomastigotas metacíclicas (TMs) de diferentes cepas do Trypanosoma cruzi liberam vesículas extracelulares e proteínas solúveis de maneira diferenciada, e qual o efeito desses fatores na invasão celular, com foco nas moléculas de superfície gp82 e gp90. TMs da cepa CL, altamente infectiva, e da cepa G, pouco infectiva, foram incubados por 1 hora em meio completo (D10) ou em PBS++. O meio condicionado (MC), coletado após centrifugação dos parasitas, e denominado MC-CL e MC-G, foi usado em ensaios de invasão celular e análise por Western blot. Células HeLa foram incubadas por 1 hora com TMs da cepa CL em D10, ou da cepa G em PBS++ que induz espalhamento/exocitose de lisossomos e promove a invasão, na ausência ou na presença de MC. A internalização de parasitas foi significativamente reduzida na presença de MC-G, mas não de MC-CL. Análise de MC por Western blot, usando anticorpos monoclonais contra gp82 e gp90, que funcionam como promotor e regulador negativo da invasão celular, respectivamente, revelou altos níveis de gp82 a gp90 em MC-G e baixos níveis em MC-CL. O MC da cepa G gerado em PBS++, contendo quantidades menores de gp90 e gp82 quando comparado com o MC produzido em D10, mostrou efeito inibitório menor sobre a invasão por TMs. A pré-incubação de MC-G (D10) com anticorpo anti-gp90 ou anti-gp82 que não reconhece TMs vivos neutralizou a atividade inibitória da invasão celular. Vesículas de diversos tamanhos e fatores solúveis, obtidos pelo fracionamento do MC-G e contendo moléculas gp82 e gp90, foram capazes de inibir significativamente a invasão celular de TMs. Nossos resultados sugerem que fatores espontaneamente liberados por TMs, contendo altos níveis de gp82 e gp90, interferem no processo de internalização dos parasitas, gp82 presumivelmente competindo pelo receptor da célula hospedeira com a molécula de superfície dos TMs, e gp90 contribuindo mais ainda para modular negativamente a invasão.