Peptídeos derivados de regiões determinantes de complementariedade (CDRs) de imunoglobulinas de camelídeos : avaliação da atividade antitumoral em modelo de melanoma murino B16F10-nex2 e mecanismos imunomodulatórios

• Autor(a) principal: Silva, Larissa Reis da [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2017
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=5457390; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/50653
• topic: In vitro e in vivo; Melanoma metastático; Imunomodulação; In vitro and in vivo; Metastatic melanoma; Immunomodulation

O melanoma cutâneo é um tipo de câncer de pele que tem origem nos melanócitos transformados, e é uma das neoplasias mais agressivas, com predominância em adultos brancos. Existe uma estimativa de casos de 5.670 em 2016, sendo 3.000 homens e 2.670 mulheres (INCA), a qual reflete a maior quantidade de tumores primários que são prontamente removidos cirurgicamente, enquanto os tumores metastáticos levam a óbito 75-90% dos pacientes em 5 anos. Isso se deve principalmente à resistência do melanoma a quimioterapia e radioterapia. Estudos clínicos recentes mostram resultados promissores na utilização de anticorpos monoclonais dirigidos contra moléculas reguladoras da resposta imune (ex. ipilimumab e pembrolizumab) no tratamento do melanoma metastático, bem como inibidores de moléculas de sinalização como B-RAF mutado (ex. vemurafenib) ambos aprovados pelo FDA dos EUA. Nosso laboratório tem estudado peptídeos sintéticos bioativos como uma alternativa para o desenvolvimento de agentes antitumorais. Em particular, são estudados peptídeos derivados de regiões determinantes de complementariedade (CDRs) de anticorpos monoclonais. Os camelídeos são capazes de produzir anticorpos que possuem apenas cadeias pesadas homodiméricas, com domínios variáveis específicos denominados VHHs, são altamente resistentes às mudanças de temperatura, pH, além de terem maior solubilidade. A ausência de um domínio variável de cadeia leve é compensada pela presença de VHCDRs que proporcionam uma superfície de ligação ao antígeno com maior afinidade quando comparada à dos anticorpos convencionais humanos. Neste trabalho desenvolvemos peptídeos sintéticos derivados de CDRs de imunoglobulinas naturais de camelídeos e analisamos a atividade antitumoral in vitro e in vivo em modelo de melanoma murino singêneico B16F10-Nex2 visando os possíveis mecanismos de ação destes peptídeos. Foram sintetizados três peptídeos derivados de diferentes CDRs os quais foram utilizados para análises de atividade antitumoral in vitro e in vivo. A terapia sistêmica com esses peptídeos mostrou uma proteção antitumoral significativa ao utilizar-se um modelo de melanoma murino metastático em animais singeneicos. Entretanto, essa proteção não ocorre por atividade direta dos peptídeos sobre as células tumorais (indução de citotoxicidade, inibição da proliferação celular e migração) e sim por meio da intervenção do sistema imunológico que é estimulado por estes peptídeos, visto que animais imunodeficientes não foram protegidos pelos peptídeos contra o melanoma metastático. Posteriormente, nós verificamos que os peptídeos induzem ativação de células dendríticas derivadas de medula óssea, bmDCs (bone-marrow DCs), para proteção terapêutica contra o melanoma metastático. Os peptídeos induziram a produção de óxido nítrico (NO) em bmDCs, aumento da expressão de marcadores de ativação (CD40, CD80 e CD86), aumento da proliferação linfocitária específica e dependente de bmDCs previamente estimuladas com os peptídeos, e aumento de citocinas pró-inflamatórias, incluindo IL-6, IFN-γ, TNF-α e IL 17. Entretanto, apesar dos mecanismos in vivo terem sido parcialmente elucidados, estudos posteriores são necessários para determinar os mecanismos moleculares envolvidos na ativação de bmDCs para a organização da resposta imune antitumoral, bem como alvos e vias de sinalização envolvidos. Em conclusão, esse trabalho apresenta três novos peptídeos derivados de CDRs de camelídeos com atividades antitumorais imunomodulatórias in vitro e in vivo, os quais podem surgir como importantes candidatos para a imunoterapia do melanoma metastático