Reprodutibilidade de padrões morfológicos no teste de autoanticorpos contra antígenos celulares (FAN-HEp-2) em diferentes substratos

• Autor(a) principal: Silva, Monica De Jesus [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2020
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=9544139; https://repositorio.unifesp.br/xmlui/handle/11600/64651
• topic: Autoanticorpos; Anticorpos Antinúcleo; Imunofluorescência Indireta; Células HEp-2; Doenças Autoimunes; Autoantibody; Antinuclear Antibodies; Immunofluorescence; HEp-2 Cells; Autoimmune Diseases

O teste de imunofluorescência indireta em células HEp-2 (IFI-HEp-2) é considerado padrão ouro para pesquisa de autoanticorpos anticélula (AC). Contudo, condições de cultivo e fixação celular interferem diretamente na preservação e distribuição antigênica, podendo impactar o reconhecimento dos padrões de imunofluorescência (1,2). Objetivo: Avaliar o fenômeno da não reprodutibilidade de resultados no teste de IFI-HEp-2 em diferentes substratos (lâminas) comerciais, comparando pacientes com doenças autoimunes (DAI), doenças não-autoimunes (DNAI) e indivíduos hígidos. Materiais e Métodos: Foram testadas 868 amostras de soro de 275 pacientes DAI, 293 de pacientes com DNAI e 300 amostras de doadores de sangue (DS) diluídas a 1:80 e processadas em lâminas de IFI-HEp-2 de quatro fornecedores distintos, seguida das leituras realizadas por três observadores independentes, experientes que desconheciam as características clínicas das amostras. Analisamos separadamente a reatividade em cada compartimento celular e a reatividade global, definida como reatividade contra qualquer compartimento celular. O grau de concordância obtido entre as lâminas recebeu pesos proporcionais ao número de lâminas concordantes, estabelecendo-se um escore ponderado (variando de 1 a 100) para grupos específicos de amostras. As variáveis qualitativas foram analisadas pelo teste do Chi-quadrado e as análises de concordâncias pelo teste Kappa. Todos os dados foram analisados no software SPSS 20.0 em nível de significância de p<0,05. Resultados: 402 amostras foram negativas nas quatro lâminas e excluídas do estudo. O escore ponderado de concordância de reatividade global nas 466 amostras restantes (238 DAI, 119 DNAI e 109 DN) foi considerado regular (74,5). O compartimento nuclear apresentou a maior pontuação de concordância (83,6) seguida do compartimento placa metafásica (78,9), compartimento citoplasmático (77,4), e nucléolo (72,4). Entre os grupos clínicos, o grupo DAI (78,0) apresentou escore de concordância global superior aos grupos DNAI (70,6) e DS (71,3). Amostras com menor intensidade de imunofluorescência (+/4) apresentaram maiores taxas de discordância que amostras com alta intensidade (++++/4). Por exemplo, no grupo DAI a taxa de discordância no compartimento nuclear foi de 12,5% para amostras ++++/4 e de 95,6%para amostras +/4. O mesmo fenômeno foi observando nos grupos DNAI e DS. Os padrões morfológicos nucleares de maior robustez foram o Centromérico (escore 78,4), Múltiplos Pontos Isolados (73,6) Pontilhado Grosso, (71,3) e Homogêneo (67,9). Para os padrões citoplasmáticos, o Pontilhado Reticulado (68,6) foi o mais robusto. Conclusão: O fenômeno da não reprodutibilidade de resultados em distintas lâminas HEp-2 ocorre com alta frequência e predominantemente em amostras de baixa intensidade.