Análise da variação no número de cópias (CNV) de DNA em uma família com síndrome NEM 2A e mutação p.G533C no gene RET: identificação de regiões associadas à predisposição para o desenvolvimento de metástase aos linfonodos

• Autor(a) principal: Araujo, Aline Neves [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2013
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://repositorio.unifesp.br/handle/11600/22536
• topic: Neoplasia Endócrina Múltipla Tipo 2a; Transfecção; Variações do Número de Cópias de DNA; Carcinoma Medular; Neoplasias da Glândula Tireoide

O carcinoma medular da tiroide (CMT) e um tumor maligno originado das celulas C da tiroide, que pode ocorrer na forma hereditaria como parte da sindrome de neoplasia endocrina multipla do tipo 2 (NEM 2), ou na forma esporadica. A forma hereditaria e dividida nas variantes clinicas NEM 2A, NEM 2B e CMTF (carcinoma medular de tiroide familial). Nosso grupo identificou uma nova mutacao no gene RET (p.G533C) em uma familia com NEM 2A. Uma vez que a analise de seguimento dos pacientes indicou uma heterogeneidade clinica entre os portadores da mutacao, principalmente associada a presenca de metastase aos linfonodos, tivemos como objetivo principal investigar se a variacao no numero de copias (CNV) de DNA, presente na linhagem germinativa, poderia estar associada a predisposicao ao desenvolvimento de metastase aos linfonodos nesta familia, bem como correlacionar as CNVs candidatas as demais caracteristicas clinicas. Para isso, quinze pacientes com CMT e mutacao p.G533C foram divididos em dois grupos (com presenca de metastase aos linfonodos, n=8, e sem metastase, n=7) e utilizados em um screening inicial, pela hibridizacao individual de seus DNAs em chips da plataforma Genome-Wide Human SNP Array 6.0. A analise comparativa entre os grupos resultou na identificacao de dez regioes contendo CNVs que poderiam estar associadas a agressividade do CMT. As regioes candidatas, algumas delas contendo genes, foram avaliadas pela reacao em cadeia da polimerase quantitativa (qPCR) em um grupo maior de pacientes da familia (n=26), composto pelos individuos iniciais alem de mais membros da familia. A validacao dessas CNVs por qPCR identificou uma CNV associada ao fenotipo mais agressivo, observado pela presenca de metastase aos linfonodos na familia (Teste Exato de Fisher; 0,05), que foi a delecao de FMN2 (P=0,0362). As regioes alteradas tambem foram analisadas em conjunto, e o Teste Exato de Fisher revelou que as alteracoes (delecoes/amplificacoes) foram diferentes entre o grupo metastatico e nao metastatico (P=0,0310), sendo que as delecoes no grupo metastatico (P=0,0375) apresentaram-se como mais determinantes para diferenciar os grupos do que as amplificacoes no grupo nao metastatico (P=0,0873). Os dados sugerem que, em geral, as delecoes foram mais associadas ao pior curso clinico da doenca, como observado pela CNV de delecao que contem o gene FMN2 que foi relacionada a presenca de metastase aos linfonodos, assim como o agrupamento das regioes deletadas foi tambem relacionado a metastase. Em conclusao, nos definimos um perfil de CNVs relacionadas a presenca de metastase aos linfonodos em pacientes com CMT e mutacao p.G533C no gene RET