Papel da Interleucina-9 na imunopatologia da infecção experimental por Trypanosoma cruzi
Autor(a) principal: | |
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Data de Publicação: | 2021 |
Tipo de documento: | Tese |
Idioma: | por |
Título da fonte: | Repositório Institucional da UNIFESP |
Texto Completo: | https://repositorio.unifesp.br/xmlui/handle/11600/62209 |
Resumo: | A doença de Chagas é uma parasitose causada pelo protozoário T. cruzi e afeta cerca de 8 milhões de pessoas no mundo. O balanço de citocinas pró e anti inflamatórias produzidas durante a resposta imunológica contribui para a definição do curso da doença. A persistência do parasita em determinados tecidos provoca estímulo inflamatório crônico, desequilíbrio do estresse oxidativo celular que pode ocasionar dano tecidual e fibrose. Pacientes com cardiopatia chagásica crônica apresentaram elevação nos níveis de IL9, importante citocina que atua na regulação da ativação e maturação de mastócitos e de processos inflamatórios lesivos e fibrogênicos. Apesar de dados escassos e controversos sobre o papel da IL9 em outras patologias, pouco se conhece sobre essa interleucina na doença de Chagas. Portanto, este trabalho tem o intuito de avaliar o papel da IL9 no curso da infecção por T. cruzi in vitro e in vivo. In vitro foi observado que o pré-tratamento com a IL9 recombinante (rIL9) reduz a porcentagem de mioblastos e macrófagos derivados de medula óssea infectados e o número de parasitas internalizados após 3h de invasão, e esse efeito foi revertido ao neutralizar a ação da IL9 com o anticorpo 9CI. Tratamento após a invasão (pós-tratamento) com rIL9 em mioblastos também reduz a multiplicação dos parasitas e o número de parasitas liberados no meio extracelular após 96 horas pós infecção (hpi). Adicionalmente, a neutralização com 9CI bloqueia esse efeito em ambos tipos celulares, e até aumenta a multiplicação dos parasitas em mioblastos em 96hpi. O pós-tratamento de mioblastos infectados com rIL9 aumenta a produção de NO em 72hpi e a adição de L-NMMA (inibidor de NO sintase) resulta no retorno da multiplicação do parasita similar aos controles. Nenhuma diferença foi observada na síntese de citocinas anti e pró-inflamatória nos mioblastos infectados e pós-tratados com rIL9 após 72hpi. Nos macrófagos infectados e tratados com rIL9 não houve diferença na síntese de NO, mas o pós-tratamento com rIL9 aumentou a síntese de IL6 e reduziu a produção de TGF-beta. In vivo, detectamos significativo aumento de células Th9 e Tc9 nos esplenócitos de camundongos Balb/c infectados com tripomastigotas da cepa Y de T. cruzi na fase crônica da infecção, acompanhado da elevação na síntese de IL9 por estas células. Ademais, aumento significativo nos níveis de IL9 foi encontrado no lisado de coração desses animais em fase crônica em comparação com seu controle não infectado. Quando os animais infectados foram tratados com anticorpo neutralizante (9CI) ou rIL9 durante a fase aguda (15dpi), não observamos nenhuma diferença na carga parasitária no coração em nenhum dos grupos avaliados. Contudo, a neutralização de IL9 aumentou a área de fibrose cardíaca, com o aumento da deposição de colágenos I e III na matriz extracelular do coração, e elevou a síntese de IFN-γ, TNF-α e IL6 no lisado de coração durante a fase crônica da infecção. Já o tratamento com rIL9 reduziu a área de fibrose cardíaca e a síntese de TNF-α e IL12 no coração. Esses dados demonstram que a IL9 interage de modo célula-específica com os mioblastos e os macrófagos contribuindo na resposta celular contra a infecção de T. cruzi, entretanto por diferentes mecanismos. In vivo, a IL9 demonstra ser uma importante interleucina que participa na resposta inflamatória do hospedeiro durante a fase crônica da infecção experimental com essa cepa, sendo importante para o desenvolvimento da resposta anti-fibrótica. |
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Silva, Nadjania Saraiva de Lira [UNIFESP]http://lattes.cnpq.br/4425227736940469http://lattes.cnpq.br/3754467086294573http://lattes.cnpq.br/6797056889448052Mortara, Renato Arruda [UNIFESP]Toqueiro, Cristina Mary Orikaza [UNIFESP]Universidade Federal de São Paulo2021-11-09T19:07:26Z2021-11-09T19:07:26Z2021-06-07Silva, N. S. L. Papel da Interleucina-9 na imunopatologia da infecção experimental por Trypanosoma cruzi. São Paulo, 2021. 84 f. Tese (Doutorado em Microbiologia e Imunologia) – Escola Paulista de Medicina, Universidade Federal de São Paulo, São Paulo, 2021.https://repositorio.unifesp.br/xmlui/handle/11600/62209A doença de Chagas é uma parasitose causada pelo protozoário T. cruzi e afeta cerca de 8 milhões de pessoas no mundo. O balanço de citocinas pró e anti inflamatórias produzidas durante a resposta imunológica contribui para a definição do curso da doença. A persistência do parasita em determinados tecidos provoca estímulo inflamatório crônico, desequilíbrio do estresse oxidativo celular que pode ocasionar dano tecidual e fibrose. Pacientes com cardiopatia chagásica crônica apresentaram elevação nos níveis de IL9, importante citocina que atua na regulação da ativação e maturação de mastócitos e de processos inflamatórios lesivos e fibrogênicos. Apesar de dados escassos e controversos sobre o papel da IL9 em outras patologias, pouco se conhece sobre essa interleucina na doença de Chagas. Portanto, este trabalho tem o intuito de avaliar o papel da IL9 no curso da infecção por T. cruzi in vitro e in vivo. In vitro foi observado que o pré-tratamento com a IL9 recombinante (rIL9) reduz a porcentagem de mioblastos e macrófagos derivados de medula óssea infectados e o número de parasitas internalizados após 3h de invasão, e esse efeito foi revertido ao neutralizar a ação da IL9 com o anticorpo 9CI. Tratamento após a invasão (pós-tratamento) com rIL9 em mioblastos também reduz a multiplicação dos parasitas e o número de parasitas liberados no meio extracelular após 96 horas pós infecção (hpi). Adicionalmente, a neutralização com 9CI bloqueia esse efeito em ambos tipos celulares, e até aumenta a multiplicação dos parasitas em mioblastos em 96hpi. O pós-tratamento de mioblastos infectados com rIL9 aumenta a produção de NO em 72hpi e a adição de L-NMMA (inibidor de NO sintase) resulta no retorno da multiplicação do parasita similar aos controles. Nenhuma diferença foi observada na síntese de citocinas anti e pró-inflamatória nos mioblastos infectados e pós-tratados com rIL9 após 72hpi. Nos macrófagos infectados e tratados com rIL9 não houve diferença na síntese de NO, mas o pós-tratamento com rIL9 aumentou a síntese de IL6 e reduziu a produção de TGF-beta. In vivo, detectamos significativo aumento de células Th9 e Tc9 nos esplenócitos de camundongos Balb/c infectados com tripomastigotas da cepa Y de T. cruzi na fase crônica da infecção, acompanhado da elevação na síntese de IL9 por estas células. Ademais, aumento significativo nos níveis de IL9 foi encontrado no lisado de coração desses animais em fase crônica em comparação com seu controle não infectado. Quando os animais infectados foram tratados com anticorpo neutralizante (9CI) ou rIL9 durante a fase aguda (15dpi), não observamos nenhuma diferença na carga parasitária no coração em nenhum dos grupos avaliados. Contudo, a neutralização de IL9 aumentou a área de fibrose cardíaca, com o aumento da deposição de colágenos I e III na matriz extracelular do coração, e elevou a síntese de IFN-γ, TNF-α e IL6 no lisado de coração durante a fase crônica da infecção. Já o tratamento com rIL9 reduziu a área de fibrose cardíaca e a síntese de TNF-α e IL12 no coração. Esses dados demonstram que a IL9 interage de modo célula-específica com os mioblastos e os macrófagos contribuindo na resposta celular contra a infecção de T. cruzi, entretanto por diferentes mecanismos. In vivo, a IL9 demonstra ser uma importante interleucina que participa na resposta inflamatória do hospedeiro durante a fase crônica da infecção experimental com essa cepa, sendo importante para o desenvolvimento da resposta anti-fibrótica.Chagas’ disease is a parasitosis caused by Trypanosoma cruzi that affects about 8 million people worldwide. Pro- and anti-inflammatory cytokines balance produced during immunological response contributes to disease prognosis and progression. Parasite persistence in host tissues can induce chronic inflammatory stimulus that lead to tissue injury and fibrosis. Patients with chronic chagasic cardiomyopathy exhibited increased levels of IL9, an important cytokine in regulation of mast cell activation and maturation, inflammatory and fibrinogenic processes. Although scarce, and sometimes contradictory, data about IL9 role in other pathologies, few studies explored the influence of this cytokine in Chagas’ disease pathology. Hence, the aim of this study was to evaluate IL9 role in progression of T. cruzi infection in vivo and in vitro. In vitro infection comprised the murine cells C2C12 myoblasts and bone marrow-derived macrophages treated prior or post-infection (pre-treatment or post-treatment, respectively) with rIL9 or 9CI (IL9 neutralization antibody). Pre-treatment with the cytokine reduced the number of infected cells and internalized parasites, while post-treatment demonstrated that rIL9 also can decrease multiplication of intracellular amastigotes and therefore diminish parasite release to supernatant after 96 hours of infection in both cell types. These parasite control effects were due to IL9 action since they were abolished when incubated with an anti-IL9 monoclonal antibody 9CI. Although IL9 exerted similar effects in parasite invasion and multiplication on both myoblasts and macrophages, the mechanisms involved in parasite growth restriction demonstrated to be cell specific. In C2C12 the increased production of nitric oxide (NO) induced by IL9 treatment was essential for parasite reduced multiplication, whereas macrophage response resulted in increased IL6 and reduced TGF- levels. Experimental infection of Balb/c mice with trypomastigotes of Y strain T. cruzi indicated a major role of IL9 during chronic phase, demonstrated by increased Th9 and Tc9 cells, elevated synthesis of IL9 in splenocytes and increased production of IL9 detected in the heart. IL9 neutralization increased cardiac fibrosis and synthesis of collagen I and III in Balb/c mouse heart during chronic phase. These results were correlated with a sharp increase production of pro-inflammatory cytokines IFN-γ, TNFα and IL6 detected in the myocardium. In contrast, Balb/c mice treatment with rIL9 induced opposite effects. Thus, data show that IL9 can reduce invasion and multiplication of the parasites in vitro, so leading to disease control. In vivo, IL9 was elevated at experimental chronic infection of Y strain in Balb/c and this cytokine played a protective role in immunopathology response during this phase by control cardiac fibrosis and cytokine production.Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP)2017/17103-884 f.porUniversidade Federal de São PauloTrypanosoma cruziIL9FibroseColágenoPapel da Interleucina-9 na imunopatologia da infecção experimental por Trypanosoma cruziInterleukin-9 in Immunopathology of Trypanosoma cruzi Experimental Infectioninfo:eu-repo/semantics/publishedVersioninfo:eu-repo/semantics/doctoralThesisinfo:eu-repo/semantics/openAccessreponame:Repositório Institucional da UNIFESPinstname:Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP)instacron:UNIFESPEscola Paulista de Medicina (EPM)Microbiologia e ImunologiaImunologiaInteração patógeno e hospedeiroORIGINALNadjania Saraiva de Lira Silva tese 06072021.pdfNadjania Saraiva de Lira Silva tese 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A doença de Chagas é uma parasitose causada pelo protozoário T. cruzi e afeta cerca de 8 milhões de pessoas no mundo. O balanço de citocinas pró e anti inflamatórias produzidas durante a resposta imunológica contribui para a definição do curso da doença. A persistência do parasita em determinados tecidos provoca estímulo inflamatório crônico, desequilíbrio do estresse oxidativo celular que pode ocasionar dano tecidual e fibrose. Pacientes com cardiopatia chagásica crônica apresentaram elevação nos níveis de IL9, importante citocina que atua na regulação da ativação e maturação de mastócitos e de processos inflamatórios lesivos e fibrogênicos. Apesar de dados escassos e controversos sobre o papel da IL9 em outras patologias, pouco se conhece sobre essa interleucina na doença de Chagas. Portanto, este trabalho tem o intuito de avaliar o papel da IL9 no curso da infecção por T. cruzi in vitro e in vivo. In vitro foi observado que o pré-tratamento com a IL9 recombinante (rIL9) reduz a porcentagem de mioblastos e macrófagos derivados de medula óssea infectados e o número de parasitas internalizados após 3h de invasão, e esse efeito foi revertido ao neutralizar a ação da IL9 com o anticorpo 9CI. Tratamento após a invasão (pós-tratamento) com rIL9 em mioblastos também reduz a multiplicação dos parasitas e o número de parasitas liberados no meio extracelular após 96 horas pós infecção (hpi). Adicionalmente, a neutralização com 9CI bloqueia esse efeito em ambos tipos celulares, e até aumenta a multiplicação dos parasitas em mioblastos em 96hpi. O pós-tratamento de mioblastos infectados com rIL9 aumenta a produção de NO em 72hpi e a adição de L-NMMA (inibidor de NO sintase) resulta no retorno da multiplicação do parasita similar aos controles. Nenhuma diferença foi observada na síntese de citocinas anti e pró-inflamatória nos mioblastos infectados e pós-tratados com rIL9 após 72hpi. Nos macrófagos infectados e tratados com rIL9 não houve diferença na síntese de NO, mas o pós-tratamento com rIL9 aumentou a síntese de IL6 e reduziu a produção de TGF-beta. In vivo, detectamos significativo aumento de células Th9 e Tc9 nos esplenócitos de camundongos Balb/c infectados com tripomastigotas da cepa Y de T. cruzi na fase crônica da infecção, acompanhado da elevação na síntese de IL9 por estas células. Ademais, aumento significativo nos níveis de IL9 foi encontrado no lisado de coração desses animais em fase crônica em comparação com seu controle não infectado. Quando os animais infectados foram tratados com anticorpo neutralizante (9CI) ou rIL9 durante a fase aguda (15dpi), não observamos nenhuma diferença na carga parasitária no coração em nenhum dos grupos avaliados. Contudo, a neutralização de IL9 aumentou a área de fibrose cardíaca, com o aumento da deposição de colágenos I e III na matriz extracelular do coração, e elevou a síntese de IFN-γ, TNF-α e IL6 no lisado de coração durante a fase crônica da infecção. Já o tratamento com rIL9 reduziu a área de fibrose cardíaca e a síntese de TNF-α e IL12 no coração. Esses dados demonstram que a IL9 interage de modo célula-específica com os mioblastos e os macrófagos contribuindo na resposta celular contra a infecção de T. cruzi, entretanto por diferentes mecanismos. In vivo, a IL9 demonstra ser uma importante interleucina que participa na resposta inflamatória do hospedeiro durante a fase crônica da infecção experimental com essa cepa, sendo importante para o desenvolvimento da resposta anti-fibrótica. |
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