Síntese, estudos conformacionais e atividade biológica de novos análogos do peptídeo antimicrobiano gomesina

• Autor(a) principal: Mendes, Roberta Brandao [UNIFESP]
• Data de Publicação: 2016
• Tipo de documento: Dissertação
• Idioma: por
• Título da fonte: Repositório Institucional da UNIFESP
• Texto Completo: https://sucupira.capes.gov.br/sucupira/public/consultas/coleta/trabalhoConclusao/viewTrabalhoConclusao.jsf?popup=true&id_trabalho=3686566; http://repositorio.unifesp.br/handle/11600/46895
• topic: Gomesina; Síntese de peptídeos; atividade antimicrobiana atividade hemolítica atividade antitumoral GUVs ite; Gomesin; Peptide synthesis; Antimicrobial activity; Hemolytic activity; Antitumor activity; GUVs ite

A gomesina (ZCRRLCYKQRCVTYCRGR-NH2) é um peptídeo antimicrobiano isolado a partir dos hemócitos da aranha caranguejeira Acanthoscurria gomesiana possuindo quatro cisteínas que formam duas pontes de dissulfeto intramoleculares nas posições 2,15 e 6,11. É um PAM que possui um largo espectro de ação e uma alta toxicidade contra eritrócitos humanos. Este estudo teve como objetivo a síntese de novos análogos da gomesina para avaliar sua estrutura-atividade e seus mecanismos de ação em comparação com a Gm. Desta forma, foram sintetizados os análogos cíclicos e lineares, Ac-Gm2-15, Ac-[D-Lys8]-Gm2-15, Ac-[Trp7, D-Lys8]-Gm2-15, Ac-[Thr2,6,11,15]-Gm2_15A,c-[ Thr2,6,11,15,D-Lys8]-Gm2_15e Ac-[Thr2,6,11,15,D-Pro9]-Gm2_15,utilizando a síntese de peptídeos em fase sólida pela estratégia t-Boc. Em seguida os peptídeos foram clivados, purificados e caracterizados. Foram realizados ensaios de atividade antimicrobiana contra Candida albicans, 8acillus megaterium, Pseudomonas aeruginosa, Penicillium expansum, Criptococcus neoformans, Aspergillus niger, Cladosporium sp e Saccharomyces cerevisiae; atividade hernolltica sendo determinada contra eritrócitos humanos; atividade antitumoral contra células eritroleucêmicas da linhagem K562, estabilidade dos peptídeos utilizando plasma humano, estudos de análise estrutural por espectroscopia de Dicroísmo Circular, interação peptídeo/vesícula utilizando-se vesículas unilamelares gigantes (GUVs) compostas por misturas de um lipídio neutro (POPC) com um lipídio carregado negativamente (POPG) através de microscopia ótica e estudos termodinâmicos da interação peptídeo/lipídeo utilizando vesículas unilamelares grandes (LUVs) que foram injetadas em soluções peptídicas por calorimetria de titulação isotérmica (ITC). Para o ensaio de interação peptídeo/vesícula e estudos termodinâmicos da interação peptídeo/lipídeo, foram testados somente o análogo cíclico Ac-Gm2-15e o linear Ac-[Thr2,6,11,15]-Gm2_p1a5ra avaliação da importância das pontes de dissulfeto e dos resíduos de aminoácidos retirados nas porções C- e Nterminal. Os resultados mostraram que os análogos Ac-Gm2-15, Ac-[D-Lys8]-Gm2-15e Ac- [Trp", D-Lys8]-Gm2-15, foram os que apresentaram as melhores atividades antimicrobianas, principalmente contra os microrganismos A. nigere S. cere visiae, sendo melhores que a Gm. Todos apresentaram uma baixa atividade hernolltica, mesmo na concentração de 100 IJM e foram bastante resistentes a degradação. Nos estudos por Dicroísmo Circular, pudemos observar que os compostos cíclicos apresentaram conformações similares ao da gomesina, sendo em forma de I3-Hairpin e os análogos lineares apresentaram uma prevalência de conformação randômica. O mecanismo de ação lltica da Gm e do análogo Ac-Gm2-15 foram muito parecidos, sendo por desestruturação da membrana e o Ac-[Thr2,6,11,15]-Gm2_a1p5resentou um mecanismo de formação de poro. A partir dos resultados obtidos, foi possível confirmar que as pontes de dissulfeto são importantes para o mecanismo de ação lítica, uma vez que a sua remoção causa uma diminuição das atividades antimicrobianas, hernollticas e antitumorais, além de possuir uma grande contribuição na estabilidade e resistência a ação das proteases plasmáticas e que os fragmentos estudados podem ter sido menos potentes devido a menor quantidade de cargas e também devido a retirada dos aminoácidos nas porções N- e C-terminal.